英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
文献标题 PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity 影响因子 8.676（Journal for ImmunoTherapy of Cance …
阅读更多 »Cell Death Discovery | 南京大学口腔医学院：牙周膜成纤维细胞铁下垂机制新发现
《Cell Death Discovery》期刊上发表的题为“Periodontitis-level butyrate-induced ferroptosis in periodontal ligament fibroblasts by activation of ferritinophagy“的文章表明牙周炎水平的丁酸盐通过激活 NCOA4 …
阅读更多 »如何选择腺病毒、慢病毒、腺相关病毒？
病毒表达系统 腺病毒(Adenovirus) 慢病毒(Lentivirus) 腺相关病毒(Adeno-As sociate virus) 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 单链DNA病毒 复制 条件复制 不可复制 条件复制 滴度 最高可达1012pfu/ml 最高可达109TU/ml 最高可达1012-13v.g/ml 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细 …
阅读更多 »请问那乳胶法能测出失活病毒么
乳胶法（Latex agglutination test）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法，通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒，这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合，形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”（即病毒的活性丧失），但其结 …
阅读更多 »siRNA转染很有效（蛋白水平明显降低），将siRNA序列构建进慢病毒（shRNA形式）后感染细胞，荧光表达很强，但目标蛋白并未敲低，这是什么原因
你遇到的这个问题在慢病毒（lentivirus）介导的RNA干扰实验中其实挺常见，下面我们逐步分析下可能的原因： 实验现象简述： siRNA转染敲得很有效（蛋白水平明显降低）； **将siRNA序列构建进慢病毒（shRNA形式）**后感染细胞； 荧光表达很强（说明病毒成功进入细胞，且有表达）； 但目标蛋白并未敲低，几乎没有 knockdown 效果。 可能原 …
阅读更多 »测定病毒滴度时，是使用 HEK293 细胞，还是用目的细胞？
测定病毒滴度时，是否可以直接使用 HEK293 细胞，取决于你使用的病毒类型和实验目的。一般来说： 如果是腺病毒或慢病毒，HEK293 细胞（特别是 HEK293T 细胞）通常是不错的选择，因为它们表达病毒包装过程中需要的辅助因子（如腺病毒的 E1A/E1B 或慢病毒的 VSV-G），可以有效地被感染并产生明显的病毒效应。因此，很多实验室会用 293 细胞测 …
阅读更多 »用AAV进行大脑转染的需要知道的问题
使用腺相关病毒（AAV）进行大脑转染是一种常用的基因传递方法，具有较高的特异性和安全性，但在实际操作中也会面临一些问题。以下是一些常见的问题及其解决方案： 转染效率问题： 选择合适的AAV血清型：不同的AAV血清型对不同类型的神经元和大脑区域具有不同的亲和力。选择合适的血清型可以显著提高转染效率。 病毒滴度：确保使用足够高滴度的AAV病毒，但要避免过高的滴度 …
阅读更多 »嘌呤霉素筛选标记的病毒滴定 Protocol
关于使用嘌呤霉素筛选标记的慢病毒或逆转录病毒进行病毒滴定的 protocol，整理了一个常用且较为权威适用于慢病毒系统： 【嘌呤霉素筛选法的病毒滴定 Protocol】 原理简述： 将病毒感染宿主细胞，使用嘌呤霉素筛选，仅有成功整合了抗性基因的细胞能存活。最后通过计数存活细胞（克隆或整体密度）来估算病毒滴度。 实验材料： 病毒上清； HEK293T 或其他易 …
阅读更多 »Crispr/Cas9腺病毒构建流程
Crispr/Cas9 简介 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核 …
阅读更多 »293T分别包装两种病毒，浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗？
原则上可以，具体要看以下几个条件： 步骤可行性： 分别包装：在293T细胞中分别转染两种构建（比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体），收集病毒上清； 浓缩：超速离心或PEG浓缩，两种病毒分别处理； 混合感染：感染前混合两种浓缩后的病毒，用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点： T细胞激活：CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染，通常需要先用 …
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