英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
肝肺综合征（HPS）是肝病，肺内血管扩张（IPVD）和低氧血症的三联征，动脉低氧血症可引起肺血管重构（PVR）。在最近的研究中，与HPS有关的PVR中肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用已确定；细胞骨架蛋白的变化在细胞增殖中起着重要的作用。但与HPS有关的PVR中细胞骨架蛋白表达与分子机制相关性知之甚少。现分享一篇siRNA转染（Entranster）与细胞骨架蛋白 …
阅读更多 »RNA转染mir-148b在非霍奇金淋巴（NHL）放射敏感性中作用的研究
非霍奇金淋巴瘤（NHL）是具有很强异质性的一组独立疾病的总称。依据细胞来源将其分为三种基本类型：B细胞、T细胞和NK/T细胞NHL。临床大多数NHL为B细胞型，占总数70%～85%。NHL对放疗敏感。越来越多的证据表明mirRNA在调节细胞放射敏感性中起重要作用。现上传一篇RNA转染（Entranster …
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是。现分享一篇运用siRNA转染（Entr …
阅读更多 »RNA转染与桥本甲状腺炎患者T辅助细胞1型细胞研究
桥本甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis ，HT），又称慢性淋巴细胞性甲状腺炎，是一种器官特异性自身免疫性疾病，特点是甲状腺实质淋巴细胞浸润，弥漫性甲状腺肿大和自身抗体升高的升高，主要包括抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）。HT现在被认为是最常见的自身免疫性疾病，常与其他自身免疫性疾病相关，如G …
阅读更多 »siRNA转染过程中常见问题及解答
1.RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与二氢杨梅素抑制NLRP3炎性体依赖的细胞焦亡研究
越来越多的证据表明，细胞焦亡和炎性细胞程序性死亡与动脉粥样硬化有关；然而，其潜在的机制仍有待澄清。二氢杨梅素（Dihydromyricetin，DHM），一种天然的黄酮类化合物，据报道有抗氧化和抗炎的生物活性。然而，DHM对于动脉粥样硬化相关细胞焦亡的影响尚不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster）与二氢杨梅素抑制 NLRP3炎性体依赖的细胞焦亡研 …
阅读更多 »siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与启动子相关的小双链RNA激活研究
最近的一些报道表明，与启动子区互补的小激活dsRNA [双链RNA；SaRNA（小激活dsRNA）]可以上调哺乳动物细胞中的基因表达，这种现象被称为RNAa（RNA激活）。然而，关于什么是启动子靶向SARNA的靶分子，以及参与该过程的蛋白质是什么等RNAa的分子机制并不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster）与启动子相关的小双链RNA激活研究的文献 …
阅读更多 »shRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下shRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »RNA转染影响因素
1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA和 …
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