英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »RNA转染与B细胞成熟抗原和多发性骨髓瘤细胞存活研究
多发性骨髓瘤（MM）是一种无法治愈的血液恶性肿瘤，其特点是恶性浆细胞克隆性增殖，与大多数患者产生单克隆免疫球蛋白有关。细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10、干扰素-α和B细胞活化因子（BAFF）在促进MM细胞生长和耐药中的作用已得到明确阐述。越来越多的证据表明BAFF影响MM细胞的生长、存活 …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »siRNA转染实验注意事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下mRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与人单核细胞来源的树突状细胞的染色质状态调控研究
树突状细胞（DCS）是抗原（Ag）呈递细胞，具有独特的刺激幼T细胞和启动原发性免疫应答的能力。然而，DCs在中枢和外周免疫耐受的诱导和T细胞免疫应答的类型的调节中也具有关键性的作用。依赖于环境，树突状细胞（DCS）可能变得活跃或耐受性，但很少知道是否遗传的表观遗传修饰涉及这些过程。现分享一篇RNA转染（Entranster）与人单核细胞来源的树突状细胞的染色 …
阅读更多 »如果细胞密度低，铺板48h可以转染吗？
如果细胞密度较低，一般来说，细胞在转染前的培养时间是很关键的。48小时的培养时间通常是足够的，但是否适合转染还要考虑几个因素： 1. 细胞的生长状态 细胞在转染时最好处于对数生长期，也就是细胞在活跃分裂和增殖中。若细胞密度过低，可能会处于生长迟缓或衰退状态，这会影响转染效率。 细胞密度太低（<30%）：如果细胞太少，可能会影响转染试剂的吸附和细胞的转染 …
阅读更多 »RNA转染过程中细胞毒性大怎么办？
RNA转染时细胞毒性大可能的原因有： 1.RNA与转染试剂比例不佳。建议进行预实验优化。 2.细胞密度不佳。调整细胞密度。 3.细胞污染。建议彻底清洁所有细胞培养相关用品。 4.转染试剂毒性较大。建议选择毒性较小的非脂质体转染试剂，如纳米材料的Entranster试剂等。
阅读更多 »提高RNA转染效率的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与YWK-II蛋白/APLP2稳定性研究
YWK-II蛋白/APLP2是一种进化上保守的蛋白家族的成员，包括淀粉样前体蛋白（APP）和淀粉样蛋白前体蛋白（APLP1）。已经表明YWK-II /APLP2在细胞存活方面可作为Müllerian抑制物（MIS）的一种新的G蛋白偶联受体。然而，调节YWK-II /APLP2蛋白的折叠和稳定性的因素尚未确定。现分享一篇siRNA转染（Entra …
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