PKC-β抑制剂Ruboxistaurin(RBX或βLY333531)可防止糖尿病肾和视网膜微血管并发症。然而,RBX对糖尿病心肌微血管功能的影响尚不清楚。先分享一篇运用siRNA转染(Entranster)的方法与PKC-β抑制剂对糖尿病大鼠心脏微血管功能研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA转染(entranster)后沉默现象不明显怎么办?
可能原因: 1. RNA与转染试剂比例不佳。可进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳。 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。 3. RNA效率不高。选择最优RNA,并采用已知高效的RNA做对照。 4. RNA酶污染。建议无RNA酶和内毒素的吸头、离心管和溶液等材料和实验器具。 5. 转染后培养时间不够。在mRNA水平可以到48 小时以后验证结果,在蛋白水 …
阅读更多 »RNA转染试剂的对比
近期,上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R4000(Engreen)进行了一次RNA转染比较。比较情况如下: 实验方法 转染试剂:Turbofect transfection reagent(Thermo)和EntransterTM-R400 …
阅读更多 »RNA转染影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA …
阅读更多 »RNA转染与小鼠LRP5基因杂合缺失及调控成骨细胞分化研究
骨骼系统稳态受免疫系统的动态影响。低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)是Wnt信号通路的共同受体,它调节人和小鼠的骨代谢。免疫紊乱可导致骨代谢异常。目前还不清楚LRP5是否以及如何改变免疫系统的平衡来调节骨稳态。 现分享一篇RNA转染(Entranster)与小鼠LRP5基因杂合缺失改变免疫细胞形态及调控成骨细胞分化研究的文献,以供参考。
阅读更多 »siRNA转染实验注意事项
为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与SASH1和黑色素细胞研究
在小鼠胚胎中,成黑素细胞起源于背神经脊,沿着表皮和真皮之间的背侧通路迁徙,在真皮中分散,最终进入表皮,并广泛扩散。现分享一篇RNA转染(Entranster)与SASH1和黑色素细胞研究的文献,以供参考。
阅读更多 »都说RNAi很容易降解,转染效率很低,是真的吗?
RNAi就是利用降解双链RNA的酶系统,人工引入一段和目标RNA互补的序列,这样,在细胞内形成双链RNA,诱发降解机制,使目标RNA降解,无法被进一步翻译。 在转染过程中,有人就在担心,dsRNA的稳定性是相对于单链RNA而言的!RNA怎么办? RNAi中,标准的非修饰的siRNA确实容易降解,这不仅在保存过程中,而且在转染过程中。对siRNA的降解,可以合 …
阅读更多 »RNA转染与桥本甲状腺炎患者T辅助细胞1型细胞研究
桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis ,HT),又称慢性淋巴细胞性甲状腺炎,是一种器官特异性自身免疫性疾病,特点是甲状腺实质淋巴细胞浸润,弥漫性甲状腺肿大和自身抗体升高的升高,主要包括抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)。HT现在被认为是最常见的自身免疫性疾病,常与其他自身免疫性疾病相关,如G …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这 …
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