英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与人喉鳞状细胞癌研究
喉癌是头颈部第二常见的恶性肿瘤，最常见的表现为鳞状细胞癌。这种疾病的发病率正在增加，然而，其发展的机制尚不完全清楚。因此，寻找新的喉鳞状细胞癌（LSCC）的诊断和治疗方法变得尤为重要。 现分享一篇RNA转染（Entranster）与siRNA靶向骨膜蛋白对人喉鳞状细胞癌抑制作用研究的文献，以供参考。 文献地址：http://europepmc.o …
阅读更多 »体外转录法制备dsRNA中，怎么知道mRNA的靶区域在哪
在体外转录法制备dsRNA（双链RNA）的过程中，确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤，以帮助确定mRNA的靶区域： 1. 目标基因的选择 首先，确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息（通常从基因数据库中获得，如NCBI）。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA（siRNA）或小发夹RNA（s …
阅读更多 »细胞RNA转染的建议
为了做好RNA转染实验，提出几点关于细胞RNA转染实验的建议，供大家参考： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与人鼻病毒1B基因敲除和干扰素应答的再激活研究
人鼻病毒（HRV）是属于Picornaviridae家族肠道病毒属的单链正义RNA病毒。它在20世纪50年代首次被发现。将近60年后，已经鉴定出超过100种血清型/基因型病毒。HRVs（HV-A，-B，-C）是所有年龄组，尤其是儿童中呼吸道感染最常见的原因，但尚未开发出有效的治疗HVS的药物。现分享一篇RNA转染（Entranster）与人鼻病毒1B基因敲除 …
阅读更多 »转染荧光效果良好，但是24小时qpcr没有敲低，是要延长收样时间吗？
这是个很实际的问题。在转染实验中，荧光标记良好说明转染效率高，但如果qPCR在24小时没有观察到预期的基因敲低效果，可能存在以下几种情况： 1. 延长收样时间可能是一个方向 有些siRNA或shRNA介导的敲低效果在48小时甚至72小时后才会明显，因为： mRNA的半衰期可能较长； 敲低并不等于马上降解已有的mRNA； 目标蛋白的表达也可能滞后。 建议： 设 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与内皮素-1与肺动脉平滑肌细胞研究
肝肺综合征（HPS）是肝病晚期的严重并发症，其死亡率明显增加。循环介质介导的肺血管重构（PVR）在HPS发病机制中起重要作用，但其机制尚不明确。现分享一篇RNA转染（Entranster）与内皮素-1（ET-1）与肺动脉平滑肌细胞研究的文献，以供参考。
阅读更多 »影响RNA转染实验的因素有哪些？
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. 2. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试 …
阅读更多 »RNA转染与LncRNA SNHG12对胃癌细胞BGC-823增殖的影响研究
胃癌是一种常见的上皮性癌，是世界范围内最常见的第五种恶性肿瘤。近年来胃癌的发病率一直呈上升趋势。每年约有一百万例胃癌发生，其中东亚地区占到50%，尤其是中国，严重危害人民健康和生命。中国胃癌的年发病率约为400000，占全世界病例总数的42%，并且总死亡率逐年上升。因此，寻找可靠的胃癌标志物和靶点是至关重要的 …
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