英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
使用动物体内转染试剂Entranster-in vivo进行体内转染实验时，由于局部注射容易造成药液分布不均，在注射的近端，药液浓度高，效果明细；远端，药液浓度低，效果低一些。所以，一方面，需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织，另一方面，后续实验取样时，在保证实验的 …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与miRNA-33a干扰甲型流感病毒复制的研究
甲型流感病毒是季节性流感的主要病原体，有引起大流行爆发的趋势，如1918年、1957年、1968年和2009年。它是一种包膜病毒，感染后，流感病毒通过受体介导的内吞作用进入细胞。随后，病毒脱去外壳，病毒核糖核蛋白（VRNP）复合物释放到细胞质中，然后转运到细胞核开始病毒复制。子代病毒聚集在质膜和芽上，并从受感染的细胞中释放出来。现分享一篇ECL发 …
阅读更多 »siRNA转染与肝肺综合征有关的肺血管重构中细胞骨架蛋白研究
肝肺综合征（HPS）是肝病，肺内血管扩张（IPVD）和低氧血症的三联征，动脉低氧血症可引起肺血管重构（PVR）。在最近的研究中，与HPS有关的PVR中肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用已确定；细胞骨架蛋白的变化在细胞增殖中起着重要的作用。但与HPS有关的PVR中细胞骨架蛋白表达与分子机制相关性知之甚少。现分享一篇siRNA转染（Entranster）与细胞骨架蛋白 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法
一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中， 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液，此法非常简单，但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液，要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外，即以腮腺导管为中心，切成一直径约2～3cm的圆形粘膜片，将此粘膜片，与周围组织分开，穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …
阅读更多 »动物实验系列篇章之五——实验动物的采血法
实验研究中，经常要采集实验动物的血液进行常规质量检测、细胞学实验或进行生物化学分析，故必须掌握正确的采集血液的技术。采血方法的选择，主要决定于实验的目的和所需血量以及动物种类。 一、大鼠、小鼠的采血方法 (一)剪尾采血：需血量很少时常用本法，如作红、白细胞计数、血红蛋白测定、制作血涂片等可与此法。动物麻醉后，将尾尖剪去约5mm，从尾部向尾尖部按摩，血即从断端 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与三氯乙烯和肝癌发生的研究
三氯乙烯（TCE）是一种挥发性有机化学试剂，已广泛应用于工业有机溶剂中，是大气、土壤、地下水和食品中的常见污染物。由于肝脏是主要的TCE靶器官之一，TCE引起的肝损伤在职业工作者中经常被报道，TCE暴露被怀疑与肝癌的风险增加有关。在动物实验中，TCE处理可诱导小鼠肝细胞癌（HCC），但其机制尚不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster） …
阅读更多 »动物实验系列篇章之一——实验动物的抓取和固定
在进行实验时，为了不损伤动物的健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，首先要限制动物的活动，使动物处于安静状态，工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前，必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴，不能恐吓动物，同时，要爱惜动物，使动物少受痛苦。 一、小鼠 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手 …
阅读更多 »用AAV进行大脑转染的需要知道的问题
使用腺相关病毒（AAV）进行大脑转染是一种常用的基因传递方法，具有较高的特异性和安全性，但在实际操作中也会面临一些问题。以下是一些常见的问题及其解决方案： 转染效率问题： 选择合适的AAV血清型：不同的AAV血清型对不同类型的神经元和大脑区域具有不同的亲和力。选择合适的血清型可以显著提高转染效率。 病毒滴度：确保使用足够高滴度的AAV病毒，但要避免过高的滴度 …
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