英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
根据来源分类 原代细胞分离于动物或植物的组织，经培养获得。细胞一旦分裂就成为有限传代细胞株，并且有可能变成无性增殖化细胞。把正常细胞来源的有限传代细胞株持续传代，筛选出快速生长的细胞，就有可能把有限传代细胞祩转变成持续传代的细胞株，这个操作就是自然转化。 来源 与组织相溶性 维护 加倍 原代细胞 动物组织、胚胎或成体 典型 难 0 …
阅读更多 »DNA转染试剂对比
由此可见，Entranster-H4000具有更好的转染效果。
阅读更多 »嘌呤霉素筛选标记的病毒滴定 Protocol
关于使用嘌呤霉素筛选标记的慢病毒或逆转录病毒进行病毒滴定的 protocol，整理了一个常用且较为权威适用于慢病毒系统： 【嘌呤霉素筛选法的病毒滴定 Protocol】 原理简述： 将病毒感染宿主细胞，使用嘌呤霉素筛选，仅有成功整合了抗性基因的细胞能存活。最后通过计数存活细胞（克隆或整体密度）来估算病毒滴度。 实验材料： 病毒上清； HEK293T 或其他易 …
阅读更多 »培养基中pH 的调节
大多数细胞系增殖的最适pH 为7. 4, 当培养液逐渐变酸或变碱时，细胞的活力和增殖率将呈下降趋势。培养液必须缓冲细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺所产生的CO2 及乳酸。人们曾一度用碳酸氢盐、HCO3–与空气中CO2 共同构成一个缓冲体系，碳酸氢盐的低pka(pka=6. 1) 在pH7. 4 左右产生微弱的缓冲效能。无毒缓冲剂，如PIPES(pka=6 …
阅读更多 »细胞生长缓慢的原因分析
开始培养细胞后，就恨不得写好每一天的进度计划，甚至连出成果那天的日期都预估好，然而，生活总是充满了意外…… 我的细胞，你为啥长的这么慢呢？？究其原因，真是丰富多彩…… 如果整个实验室只有你一个人遇到这个问题…… 1. 检査你所培养的细胞是否存在污染。 (a)如果培养细胞未添加抗生素（必须添加！），细胞污染则是不可避免的。 (b) 检测可能污染的途径和原因（无 …
阅读更多 »细胞转染效率的影响因素
1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 还有，尽量选择无 …
阅读更多 »做好RNA转染的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »MTT法细胞增殖检测中需要注意的8大问题
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活的方法。MTT，即四氮唑化合物，能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内，甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后，在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值，计算细胞浓度。 需注意的是，MTT只能与活 …
阅读更多 »湖羊起源、高繁殖力和环境适应性的基因组学研究（备注：填补了很多空白，有意义的文章）
文献标题 Genomic Insights into the Origin, High Fecundity and Environmental Adaptation of Hu Sheep （湖羊起源、高繁殖力和环境适应性的基因组学研究） 发表期刊与影响因子 期刊名称：Advanced Science 影响因子：15.1（根据2025年JCR数据） 一、文献 …
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