英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1）实验条件优不佳：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其 …
阅读更多 »电转染实验中易出现的问题
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用 …
阅读更多 »磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤
前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项，并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定？为什么磷酸钙转染并不经济？》比较感兴趣。在这里，对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解，在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享，以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这有利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …
阅读更多 »请问嘌呤霉素的持续筛选需要每天更换含嘌呤霉素的培养基吗？还是筛选的时候加一次就行？
非常专业的问题！我来详细解答一下 嘌呤霉素筛选（puromycin selection） 的正确操作流程和原理，帮助你获得高效、稳定的筛选结果。 嘌呤霉素持续筛选时：培养基更换原则 嘌呤霉素筛选是为了筛出成功整合（或表达）抗性基因的细胞，通常建议： 每天或隔天更换含嘌呤霉素的新鲜培养基。 原因： 嘌呤霉素在培养基中会逐渐失效（降解或被细胞吸收），尤其在高细胞 …
阅读更多 »慢病毒感染后多长时间换液和多长时间检测?
在慢病毒感染的实验中，通常的做法是，在感染后24小时更换培养液，目的是去除未吸附的病毒和残留的病毒介质，避免对细胞的毒性影响。更换培养液后，细胞会继续培养，通常会保持培养在常规的全培液中。 对于延长观察时间的问题，感染后72小时一般是观察慢病毒感染效果的一个标准时间点，因为大多数慢病毒的转导效率在72小时内达到峰值。尽管感染后24小时更换培养液，但并不意味着 …
阅读更多 »细胞转染效率的影响因素
1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 还有，尽量选择无 …
阅读更多 »细胞冻存的7个注意事项
一、细胞冻存 方法： 冻存液最好现配：按1：3：6（或1：2：7） 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理， 对于贴壁细胞： 1 吸出旧培养液加PBS冲洗一次 2胰酶消化 3加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止 4离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收 …
阅读更多 »30个关于CCK-8的Q＆A
Q1: 一个孔中应接种多少个细胞？ A1: 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 Q2: 能否用3 …
阅读更多 »siRNA转染至细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »如何分离成纤维细胞？
下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10 ~ 13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 胚胎的分离 适用哺乳动物（仓鼠、小鼠和大鼠） 采用认可的方案处死啮齿动物 立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。若可能，置紫外灯下照射5分钟 用无齿的摄子和剪子在前腿下作一腹部水平切 …
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