英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
脑和肌肉芳烃受体核转位蛋白1（BMAL1）是昼夜节律振荡的核心成分，参与了许多生理活动。越来越多的证据表明BMAL1在生殖生理学中发挥着重要作用。 2022年3月2日，Yin Jiang 等人在Front Endo-crinol（Lausanne）上发表了一篇题为Critical Roles of the Circadian Transcription Fa …
阅读更多 »电穿孔和电融合技术原理及流程
[实验原理] 当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用 …
阅读更多 »无菌操作的注意事项及常见问题
做不同的实验，操作上会有小小的不同，而且不可能每个动作都被描述，所以实验时必须注意自己的动作。通常要注意的就是每项操作时都要尽可能减少污染的可能性，所以动作要尽量减少。 距离，尽量将所需要的物品放在离手最近的地方。距离越近，移动就越少。 暴露，在空气中移动物品的时间越长，接触空气中微粒的概率则越大。试剂瓶敞口在空气中的时间越长，掉落进去的空气中的微粒越多。灼 …
阅读更多 »建立透析的方法步骤
1. 剪下一段足够装得下要透析物质的透析袋，在每个末端留下大概2 英寸（总共留下4英寸）来捆绑透析袋。（可以买到特殊的管子来进行微量的透析。）2. 透析袋的两端都要打结，或者用透析夹封住末端。3. 用戴手套的手打开透析袋的一个末端，另一个手拿住透析袋，把样品认真地装入透析袋中。4. 扎住或者夹住透析袋的末端，夹住之前先挤压赶走气泡，检查渗漏，尤其注意末端。5 …
阅读更多 »western-blot实验注意事项
• 滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 • 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 • 因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 • 滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的。 …
阅读更多 »靶向eIF4G1根除胰腺癌研究
文献标题 Reprograming immunosuppressive microenvironment by eIF4G1 targeting to eradicate pancreatic ductal adenocarcinoma 期刊与影响因子 期刊： Cell Reports Medicine 影响因子：14.3（2024年） 英格恩（Engree …
阅读更多 »蛋白质的长期保存——以冻干固体的形式保存
一种按适当配方制造的冻干蛋白质制剂能够在几年内保持稳定，即使是在室温(Carpenter and Chang 1996) ；然而，冻干配方的最佳溶液组成和工艺条件的研制远远超出了典型学术实验室的能力范围。一个主要的困难是大多数实验室中所用的冻干机通常没有控制样品温度的能力，不能达到低水平的残留水（如低于质量的1%~2%），而低水平的残留水是冻干产品长期保存活 …
阅读更多 »测定蛋白质浓度前需要知道什么？
因为蛋白质是细胞结构与功能的主要分了成分，因此常常需要测定样品中蛋白质的含量，鉴定混合物中的特殊蛋白质，以及分析蛋白质的组成和序列。此外，蛋白质分析对合成用于诱导抗体生成的多肽，设计供克隆用的寡核苷酸探针以及证实序列数据的正确性是十分必要的。 为确保蛋白质通过电泳技术获得最好的分离，首先有必要估计待测样品中蛋白质的浓度。如果不做分析，蛋白质总量不足就可能妨碍 …
阅读更多 »如何做好western-blot实验
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
一、原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的 …
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