英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »RNA转染与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化，骨关节退行性病变已成为高发疾病，其中代表性疾病之一为骨性关节炎（osteoarthritis, OA）。最近研究表明：WISP-１ 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-１ 在正常软骨和滑膜中几乎不表达，而在退变的软骨及滑膜（如OA）中WISP-１异常增高，通 …
阅读更多 »siRNA细胞转染操作步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »细胞RNA转染实验的一些建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与骨髓瘤细胞中RAF6蛋白表达水平研究
肿瘤坏死因子受体‑相关因子6（TRAF6）是一种重要的E3泛素连接酶 ，在先天免疫和适应性免疫中有着重要的作用 。TRAF6被报道可参与鳞状细胞癌和胃癌的侵袭性生长和转移，以及骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病 。由于TRAF6在众多的信号转导通路具有很重要的地位，使得它成为肿瘤治疗的一个潜在靶点。现分享 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与髓源性抑制细胞的抑制潜能研究
髓系来源的抑制性细胞（MDSC）介导了广泛而深刻的免疫抑制，特别是对T细胞功能的影响。在小鼠中，MDSC的特征是细胞表面分子Gr1(包括巨噬细胞和中性粒细胞标志物Ly6C和Ly6G)和CD11b的表达；在人类中，MDSC通常是CD11b+CD33+HLA-DR2。小鼠CD11b+Gr1+细胞群由两个亚群组 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与人单核细胞来源的树突状细胞的染色质状态调控研究
树突状细胞（DCS）是抗原（Ag）呈递细胞，具有独特的刺激幼T细胞和启动原发性免疫应答的能力。然而，DCs在中枢和外周免疫耐受的诱导和T细胞免疫应答的类型的调节中也具有关键性的作用。依赖于环境，树突状细胞（DCS）可能变得活跃或耐受性，但很少知道是否遗传的表观遗传修饰涉及这些过程。现分享一篇RNA转染（Entranster）与人单核细胞来源的树突状细胞的染色 …
阅读更多 »siRNA转染（engreen）与树突状细胞表观遗传修饰研究
根据不同的环境，树突状细胞（DC）可能变现为活跃或耐受性，但表观遗传修饰是否参与这些过程鲜为人知。现分享一篇siRNA转染（Entranster-R4000）与树突状细胞的表观遗传修饰研究的文献，显示表观遗传修饰可以调节人体单核细胞来源的DCs（DC）分化为活性或耐受DC。
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与YWK-II蛋白/APLP2稳定性研究
YWK-II蛋白/APLP2是一种进化上保守的蛋白家族的成员，包括淀粉样前体蛋白（APP）和淀粉样蛋白前体蛋白（APLP1）。已经表明YWK-II /APLP2在细胞存活方面可作为Müllerian抑制物（MIS）的一种新的G蛋白偶联受体。然而，调节YWK-II /APLP2蛋白的折叠和稳定性的因素尚未确定。现分享一篇siRNA转染（Entra …
阅读更多 »RNA转染与丹参酮IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用研究
丹参酮 IIA（Tanshinone IIA，Tan IIA）是一种从丹参干根中提取的生物活性物质，具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。然而，Tan IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用机制仍有待进一步阐明。现分享一篇运用RNA转染（Entranster）的方法的文献，通过阐明Tan IIA在p53基因缺陷的H1299细胞中的抗肿瘤作用机制，以确定丹参酮IIA …
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