英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »RNA转染（entranster）与il-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（oe-mscs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。oe-mscs通过调节t细胞的反应，包括调节性t细胞（treg）的上调和th1/th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，il-17在胶原诱导性关节炎（cia）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚il-17水平的升高是否会影响oe-mscs在炎症状态下的免疫抑制功 …
阅读更多 »siRNA转染（engreen）与树突状细胞表观遗传修饰研究
根据不同的环境，树突状细胞（DC）可能变现为活跃或耐受性，但表观遗传修饰是否参与这些过程鲜为人知。现分享一篇siRNA转染（Entranster-R4000）与树突状细胞的表观遗传修饰研究的文献，显示表观遗传修饰可以调节人体单核细胞来源的DCs（DC）分化为活性或耐受DC。
阅读更多 »siRNA转染效率低的原因有哪些？
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »siRNA转染（engreen）与卫星胶质细胞中P2X7受体研究
嘌呤信号能够引起炎症和免疫反应。卫星胶纸细胞（SGCs）中的P2X嘌呤受体7（P2X7）的激活可能是促进炎症和神经性疼痛中一个必不可少的组成部分。长链非编码RNAs（lncRNAs）参与多种生理和病理过程。现分享一篇针对lncRNA BC168687的小干扰RNA（Entranster）对高糖和高游离脂肪酸环境下卫星胶纸细胞P2X7受体表达的 …
阅读更多 »细胞铺板密度对于siRNA转染为什么很重要？
RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高，一些试剂由于本身毒性的影响，太低的细胞数量时毒性明显，所以会要求较高的细胞密度（汇合度），顺便说一句，看一个转染试剂 …
阅读更多 »如何优化细胞RNA转染实验条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »揭秘RNAi，缔造实验神话
用siRNA进行transient transfection不稳定，几代细胞以后，症状就会消失，所以在转染几天（1-3）后要立刻抽提蛋白，进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染，如果质粒含有抗生素位点，可以进行筛选，获得较稳定的细胞株系，但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染（infection），抗生素筛选后，可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化，骨关节退行性病变已成为高发疾病，其中代表性疾病之一为骨性关节炎（osteoarthritis, OA）。最近研究表明：WISP-１ 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-１ 在正常软骨和滑膜中几乎不表达，而在退变的软骨及滑膜（如OA）中WISP-１异常增高，通过诱导ＭＭＰs及aggrecanases的 …
阅读更多 »RNA转染与LncRNA LINC00511和肝癌细胞增殖和转移研究
长链非编码RNA在人肝癌（HCC）中异常表达，并与HCC的进展有关。lncRNA linc0511（linc0511）已被证实在一些肿瘤中作为肿瘤启动子。然而，作为一中新颖的LncRNA，linc00511的具体功能仍然不是很清楚。现分享一篇RNA转染（engreen）与LncRNA LINC00511和肝癌细胞增殖和转移研究的文献，旨在评估 …
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