英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
丹参酮 IIA（Tanshinone IIA，Tan IIA）是一种从丹参干根中提取的生物活性物质，具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。然而，Tan IIA在肿瘤细胞凋亡中的作用机制仍有待进一步阐明。现分享一篇运用RNA转染（Entranster）的方法的文献，通过阐明Tan IIA在p53基因缺陷的H1299细胞中的抗肿瘤作用机制，以确定丹参酮IIA …
阅读更多 »RNA细胞转染实验影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »RNA转染与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究
柯萨奇病毒B3（CVB3）是病毒性心肌病最重要的致病因子，但目前尚无特异性抗病毒药物。小干扰RNA（siRNA）通过转录后基因沉默，已被用作抗病毒治疗策略。现分享一篇RNA转染（Entranster）与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究的文献，以供参考。
阅读更多 »怎么样做好siRNA细胞转染实验？
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与非霍奇金淋巴瘤细胞敏感性研究
非霍奇金淋巴瘤（NHL）是具有很强异质性的一组独立疾病的总称。依据细胞来源将其分为三种基本类型：B细胞、T细胞和NK/T细胞NHL。临床大多数NHL为B细胞型，占总数70%～85%。NHL对放疗敏感。越来越多的证据表明mirRNA在调节细胞放射敏感性中起重要作用。现上传一篇运用RNA转染试剂Entranster-R4000转染mir-148b在 …
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与细胞骨架蛋白和肝肺综合征研究
肝肺综合征（HPS）是肝病，肺内血管扩张（IPVD）和低氧血症的三联征，动脉低氧血症可引起肺血管重构（PVR）。在最近的研究中，与HPS有关的PVR中肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用已确定；细胞骨架蛋白的变化在细胞增殖中起着重要的作用。但与HPS有关的PVR中细胞骨架蛋白表达与分子机制相关性知之甚少。现分享一篇siRNA转染（Entranster- …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下mRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么 …
阅读更多 »转染荧光效果良好，但是24小时qpcr没有敲低，是要延长收样时间吗？
这是个很实际的问题。在转染实验中，荧光标记良好说明转染效率高，但如果qPCR在24小时没有观察到预期的基因敲低效果，可能存在以下几种情况： 1. 延长收样时间可能是一个方向 有些siRNA或shRNA介导的敲低效果在48小时甚至72小时后才会明显，因为： mRNA的半衰期可能较长； 敲低并不等于马上降解已有的mRNA； 目标蛋白的表达也可能滞后。 建议： 设 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与人喉鳞状细胞癌研究
喉癌是头颈部第二常见的恶性肿瘤，最常见的表现为鳞状细胞癌。这种疾病的发病率正在增加，然而，其发展的机制尚不完全清楚。因此，寻找新的喉鳞状细胞癌（LSCC）的诊断和治疗方法变得尤为重要。 现分享一篇RNA转染（Entranster）与siRNA靶向骨膜蛋白对人喉鳞状细胞癌抑制作用研究的文献，以供参考。 文献地址：http://europepmc.o …
阅读更多 »RNA转染影响因素
1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA和 …
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