英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »做好RNA转染的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »siRNA转染（engreen）与树突状细胞的表观遗传修饰研究
根据不同的环境，树突状细胞（DC）可能变现为活跃或耐受性，但表观遗传修饰是否参与这些过程鲜为人知。现分享一篇siRNA转染（Entranster-R4000）与树突状细胞的表观遗传修饰研究的文献，显示表观遗传修饰可以调节人体单核细胞来源的DCs（DC）分化为活性或耐受DC。
阅读更多 »RNA转染影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »siRNA转染答疑专题总结（下）
Q9: 刚开始做实验，准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达，不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高？另外，一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响？ A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA，涉及到2个shRNA的表达和加工的问题，关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题，这就和你的载体，以及2个 …
阅读更多 »RNA转染（entranster）与il-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（oe-mscs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。oe-mscs通过调节t细胞的反应，包括调节性t细胞（treg）的上调和th1/th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，il-17在胶原诱导性关节炎（cia）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚il-17水平的升高是否会影响oe-mscs在炎症状态下的免疫抑制功 …
阅读更多 »RNA转染与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化，骨关节退行性病变已成为高发疾病，其中代表性疾病之一为骨性关节炎（osteoarthritis, OA）。最近研究表明：WISP-１ 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-１ 在正常软骨和滑膜中几乎不表达，而在退变的软骨及滑膜（如OA）中WISP-１异常增高，通 …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »siRNA转染常见问题及解答
问：siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？ 答：siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问：哪种转染试剂效果好？ …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化，骨关节退行性病变已成为高发疾病，其中代表性疾病之一为骨性关节炎（osteoarthritis, OA）。最近研究表明：WISP-１ 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-１ 在正常软骨和滑膜中几乎不表达，而在退变的软骨及滑膜（如OA）中WISP-１异常增高，通过诱导ＭＭＰs及aggrecanases的 …
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