英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Jurkat E6-1细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为150V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电 …
阅读更多 »电转染试剂对比
由此可见，在转染各类细胞系时，Entranster－E具有明显的优势，是一款比较理想的电转染试剂。
阅读更多 »细胞电转染实验效率低的原因是什么？
细胞电转染实验效率低的原因一般有以下几点： 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d …
阅读更多 »基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物
文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase （基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物） 影响因子 14.9（Trends in Biotechnology，20 …
阅读更多 »电转染实验时，DNA有什么要求？
使用Entranster-E电转染试剂进行电转染实验时，应使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素，OD值为1.8-2.0。不建议使用微型试剂盒制备DNA，因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA …
阅读更多 »Hela细胞的电转染条件是什么？
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μ …
阅读更多 »QBEmax：一种序列置换且内部保护的碱基编辑器（IF:33.1）
文献标题：QBEmax is a sequence-permuted and internally protected base editor 期刊：Nature Biotechnology 影响因子：33.1（2024年） 文献概要： 胞嘧啶碱基编辑器（CBE）显示出多重基因敲除应用的前景，但不纯的编辑、插入和脱靶仍然经常发生。我们在这里描述了QBEmax …
阅读更多 »电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备
一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶（容量为1或2L） 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl 0.5g 去离子水 950ml 250mmol/L KCl溶液 10ml 以5N …
阅读更多 »电转染实验的建议
关于细胞的电转染实验，现提出以下几点建议供大家参考： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »电转染实验时，siRNA有什么要求？
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列，以验证实验siRNA的特异性。同时也验证，针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
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