细胞生物学

持续传代的细胞株有更高的生长速率、克隆效率、成瘤率和更多的染色体组型。 持续传代细胞株经常被改造成所需的独特表型。 细胞株分化度越高，它的生长也就越慢。 常用的细胞株 细胞株 细胞类型和来源 贴壁或悬浮培养 3T3 成纤维细胞（鼠，胚胎） 贴壁培养 BHK21 成纤维细胞（叙利亚仓鼠，肾脏） 悬浮培养 MDCK 上皮细胞（狗，肾脏） 贴壁培养 ES 胚胎干细 …

1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …

RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。

1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …

成纤维细胞作为体外最易培养成功的正常细胞，用途广泛。但由于其有限的传代寿命，通常用于细胞衰老的研究，在肿瘤研究中，常常作为正常细胞对照，用于研究细胞恶性转化的条件和影响因素。另外， 它也常用于药物毒性的检测。体外培养的成纤维细胞， 还用于疾病的诊断，如染色体异常疾病的筛选、先天性代谢遗传疾病的细胞化学及生物化学检验和鉴定。 （一）材料与设备 1.设备   超 …

1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

一般情况下，在细胞电转后进行72小时的培养再加药筛选是可以的。具体取决于你的实验设计和细胞类型。以下几点你可以考虑： 细胞恢复时间：不同的细胞系在电转后需要不同的恢复时间，一般48-72小时是常见的恢复窗口。确保细胞已经充分恢复正常的代谢和生长活动。 药物筛选时间：72小时后加药筛选通常是为了确保细胞稳定表达你引入的基因或者达到特定的实验状态。如果是抗生素筛 …

       siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …