细胞生物学

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Jurkat E6-1细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为150V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电 …

细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题，尤其是原代细胞转染，转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱，望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …

对于藻类细胞电转效率特别低的问题，主要考虑以下。 质粒纯度和浓度： 如果质粒 DNA 的纯度不够，或者有蛋白质、RNA、内毒素等污染，可能会影响电转效率。建议确保质粒通过高质量的提取试剂盒提取，且 OD260/OD280 比率应在 1.8-2.0 之间。 质粒浓度过高或过低都可能影响转化率，建议对质粒浓度进行优化，一般而言，20-50 ng/μL 的浓度是比 …

进行体外哺乳动物的细胞培养，其要点之一是在培养器皿中营造一种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH 和适当的渗透压。此外，培养的外环境，尤其隔水式CO2培养箱，一定要达到稳定的温度和湿度，以防培养液蒸发，还要供给呼吸所需的O2 和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系统的CO2 。目前普遍使用的培养基一般由两部 …

方法 表达 细胞毒性 细胞类型 注释 优势 劣势 瞬时 稳定 脂质体介导方案1 可 可 可变 贴壁细胞，原代细胞系，悬浮培养体系 阳离子脂质与带负电荷的DNA 结合， 有的形成人工膜囊泡（脂质体）。产生的稳定阳离子复合物吸附并融合于带负电荷的细胞膜( Feigner et al. 1987, 1994 ) 免疫原性和细胞毒性低；可使用大质粒， 安全风险低，操 …

问：siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？ 答：siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问：哪种转染试剂效果好？ …

（一）原理 利用电子显微镜的超级放大功能， 直接观察培养细胞中支原体污染情况。 （二）材料与设备 待检测细胞， 0.05％胰蛋白酶／0.02%EDTA 、2.5％的戊二酸、1％饿酸、0.1mol/L磷酸缓冲溶液（ pH7.4 ) ，扫描电镜及相关设备。 （ 三）操作步骤 1. 将待检测细胞传代至贴有盖玻片的培养皿中。2. 37°C , CO2 培养箱中培养2 …

实验准备 目标细胞：选择适合慢病毒感染的细胞株（如 HEK293T 或靶细胞）。 病毒稀释：对病毒原液进行一系列梯度稀释（如 10−1，10−2，10−3，10−4）。 感染细胞：将稀释后的病毒感染到目标细胞中，确保设置对照组（未加病毒）。 培养：培养 48-72 小时（根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整）。 检测方法：检测报告基因表达水平（如荧光蛋白 …

在AAV病毒感染实验中，TU/mL（转导单位每毫升，Transduction Unit per milliliter）和vg/mL（病毒基因组拷贝数每毫升，Viral Genome copy per milliliter）是两种常见的病毒滴度单位。它们表示的是病毒浓度的不同方面： TU/mL：代表的是真正具有转导能力的AAV颗粒的数量，也就是能够在宿主细胞中 …