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1.标题：
LncRNA TUG1 Repressed Angiogenesis by Promoting the Ubiquitination of HuR and Inhibiting Its Nuclear Translocation in Cerebral Ischemic Reperfusion Injury长链非编码RNA TUG1通过促进HuR的泛素化并抑制其在脑缺血再灌注损伤中的核转位来抑制血管生成
- 期刊与影响因子
- 期刊名称：Advanced Science
- 影响因子：15.1（2023年数据）
- 出版信息：2025年1月31日在线发表，DOI: 10.1002/advs.202413333
- 文献概要
研究背景
脑缺血再灌注损伤（CIRI）是缺血性脑卒中血流恢复后发生的继发性损伤，促进血管生成是改善CIRI预后的潜在策略。LncRNA TUG1和RNA结合蛋白HuR均被报道参与CIRI调控，但二者在血管生成中的具体机制尚不明确。
主要发现
本研究首次揭示了TUG1/HuR/VEGFA mRNA轴在CIRI中调控血管生成的新机制：
- TUG1抑制血管生成并加重CIRI：
- TUG1在CIRI小鼠脑皮质及OGD/R处理的HUVEC中表达升高。
- TUG1敲低促进HUVEC增殖、迁移和管形成能力，上调CD31和VEGFA表达。
- TUG1过表达加重神经功能缺损、脑水肿和梗死体积，降低微血管密度。
- HuR促进血管生成并减轻CIRI：
- HuR在CIRI后表达降低，且从细胞核向细胞质转位。
- HuR直接结合VEGFA mRNA（主要结合位点355-515），增强其稳定性。
- HuR敲低抑制血管生成，过表达则促进血管生成并改善神经功能。
- TUG1与HuR直接相互作用：
- FISH、RIP、RNA pull-down和CLIP实验证实TUG1与HuR直接结合（主要结合位点：554-724、733-907、6744-6902）。
- TUG1抑制HuR核转位并促进其泛素化降解：
- TUG1过表达抑制HuR从细胞核向细胞质的转位。
- TUG1通过泛素-蛋白酶体途径（而非自噬-溶酶体途径）促进HuR降解，MG132可部分逆转该效应。
- TUG1通过HuR/VEGFA轴抑制血管生成：
- TUG1过表达降低VEGFA mRNA半衰期和多聚体比例。
- TUG1敲低可部分逆转HuR敲低对血管生成的抑制作用。
研究结论
TUG1通过直接结合HuR，抑制其核转位并促进其泛素化降解，从而减少HuR对VEGFA mRNA的稳定作用，最终抑制血管生成。TUG1/HuR/VEGFA轴是CIRI治疗的潜在新靶点。
- 采用英格恩（Engreen）产品实验部分
本研究中，英格恩（Engreen） 的 Entranser 体内转染试剂用于小鼠脑室内注射实验：
| 实验步骤 | 详细操作 |
| 转染试剂 | entranser（Engreen Biosystem） |
| 注射方式 | 脑室内注射（intracerebroventricular injection） |
| 动物模型 | C57BL/6J小鼠，MCAO/R（大脑中动脉闭塞/再灌注）模型 |
| 注射质粒 | TUG1过表达质粒、TUG1敲低质粒（shTUG1）及相关对照（GenePharma, Shanghai） |
| 注射体积 | 3.0 μL |
| 注射速率 | 0.5 μL/min |
| 注射时间 | MCAO手术前 |
| 检测指标 | mNSS神经功能评分、脑含水量、TTC染色梗死体积、CD31/VEGFA蛋白表达、免疫组化微血管密度 |
原文描述：
“Related plasmids (GenePharma, Shanghai) were diluted with transfection reagent (entranser, Engreen Biosystem) and were injected before MCAO by intracerebroventricular injection as previously described.”
该试剂成功实现了TUG1过表达和敲低质粒在小鼠脑室内的高效递送，为阐明TUG1在CIRI后血管生成中的调控作用提供了关键体内实验支持。
- 实验意义
科学意义
- 机制创新：首次揭示TUG1通过直接结合HuR并促进其泛素化降解来调控血管生成，区别于传统ceRNA机制。
- 新调控模式：发现TUG1同时调控HuR的核转位和蛋白稳定性，拓展了lncRNA与RBP相互作用的认识。
- 完善信号通路：将TUG1/HuR/VEGFA轴整合到CIRI血管生成调控网络中，提供更完整的分子机制模型。
临床应用价值
- 治疗靶点：TUG1是CIRI后促进血管生成、改善神经功能恢复的潜在治疗靶点。
- 药物开发方向：靶向TUG1-HuR相互作用的抑制剂或降解TUG1的核酸药物可能成为新型CIRI治疗策略。
- 诊断标志物：TUG1表达水平可能与CIRI严重程度和血管生成能力相关，具有预后判断潜力。