如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞,想要检测GFP阳性率,通常情况下可以通过流式细胞仪来实现,步骤如下: 收集细胞:首先收集感染后的细胞,并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞:可以通过加PI(碘化丙啶)或7-AAD等染料来排除死细胞,这样有助于提高检测的准确性。 流式检测:使用流式细胞仪时,选择FITC通道(通常是FL1通道),因为GFP的荧 …
阅读更多 »怎么根据病毒的TCID50计算给毒的MOI值
根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI(Multiplicity of Infection,感染倍数)通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述: 知道病毒的TCID50值:TCID50 是一种病毒活性的度量,表示每单位体积(通常为每毫升)病毒悬液中,能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …
阅读更多 »293T分别包装两种病毒,浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗?
原则上可以,具体要看以下几个条件: 步骤可行性: 分别包装:在293T细胞中分别转染两种构建(比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体),收集病毒上清; 浓缩:超速离心或PEG浓缩,两种病毒分别处理; 混合感染:感染前混合两种浓缩后的病毒,用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点: T细胞激活:CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染,通常需要先用 …
阅读更多 »测定病毒滴度,是否可直接使用 293 细胞?
测定病毒滴度时,是否可以直接使用 HEK293 细胞,取决于你使用的病毒类型和实验目的。 一般来说: 如果是腺病毒或慢病毒,HEK293 细胞(特别是 HEK293T 细胞)通常是不错的选择,因为它们表达病毒包装过程中需要的辅助因子(如腺病毒的 E1A/E1B 或慢病毒的 VSV-G),可以有效地被感染并产生明显的病毒效应。因此,很多实验室会用 293 细胞 …
阅读更多 »请问那乳胶法能测出失活病毒么
乳胶法(Latex agglutination test)是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法,通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒,这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合,形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”(即病毒的活性丧失),但其结 …
阅读更多 »PD-1沉默对CAR-T细胞影响研究
文献标题 PD-1 silencing impairs the anti-tumor function of chimeric antigen receptor modified T cells by inhibiting proliferation activity 影响因子 8.676(Journal for ImmunoTherapy of Cance …
阅读更多 »在比较慢病毒和正常病毒(阳性对照)时,如何合理调整 MOI 值,使其具有可比性?
慢病毒滴度较低,通常需要较高的 MOI(如 20)才能有效感染,而正常病毒滴度较高,合适的 MOI 可能为 0.1。要将两者放在一起进行比较,可能需要考虑以下因素: 实验目的: 如果关注的是相同数量的感染细胞,可以根据感染效率调整 MOI,以保证相似的感染率。 如果关注的是病毒自身的感染特性,可能需要分别选择最佳 MOI 进行单独实验,再综合分析。 病毒载量 …
阅读更多 »慢病毒转染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成病毒稀释液。 注:由于病毒浓度情况不同,具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »慢病毒感染中细胞密度需要考虑的因素
细胞类型: 不同细胞系对慢病毒的感染效率不同。例如,一些细胞对病毒更敏感,需要更低的病毒量和细胞密度。 敏感细胞系(如HEK293T):种植密度可稍低; 难感染细胞系(如原代细胞):需要更高密度。 病毒滴度: 如果病毒滴度高,细胞密度可以稍低。 如果病毒滴度较低,建议适当提高种植密度,并配合 增强试剂(如Envirus-LV) 提高感染效率。 LV感染目标: …
阅读更多 »慢病毒转染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成病毒稀释液。 注:由于病毒浓度情况不同,具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
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