英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
可能的原因和对应的解决方案如下： 1.引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 2.循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。 3.酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。 4.退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 度为梯度设计梯度 PCR …
阅读更多 »Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因？
做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生，经常有朋友反映，加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光，可亮光很快就消逝了，压完片后，条带却很弱，甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么？ 要解释这种情况发生的原因，必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化，产生荧光 …
阅读更多 »如何进行完美的Western Blot实验
条带清晰就是完美的吗？用图像软件调节明暗，用曝光时间来筛选，这样的结果可靠吗？如果在眼花缭乱的品牌和产品中快速准确地挑选好的实验用品？本视频用简短实用的方法告诉你。 本视频下载链接：https://www.engreen.cn/wp-content/uploads/2020/12/Western-Blot实验.mp4
阅读更多 »转子的类型及用途
转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。 缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后 …
阅读更多 »PCR （多聚酶链式反应）
PCR 是1985 年由Kary Mulis 在Cetus 公司发明的，是一种体外复制和扩增DNA的方法。 DNA模板首先在高温下变性，当温度降低时，DNA 两侧的寡核苷酸引物与互补序列结合，在DNA聚合酶作用下，随着温度的缓慢提升，引物逐渐延伸，两条引物之间的区域被合成。然后DNA再次变性，引物再次结合，DNA的合成再次进行，这样周而复始，重复20 …
阅读更多 »单克隆抗体制备中的免疫接种
材料靶抗原： 表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗氏完全佐剂(complete Freunds adjuvant, CFA)实验动物： 无病原体大鼠、小鼠或仓鼠弗氏不完全佐剂(incomplete Freunds adjuvant, IFA)1~2ml玻璃注射器（有Luer-Lok 接头，已消毒）三通管100ml 烧杯20G …
阅读更多 »western-blot化学发光（ECL）的特异性差怎么办
特异性差，出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面： 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量，延长洗膜时间，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20 …
阅读更多 »western-blot化学发光（ECL）时，胶片上条带很浓怎么办？
可通过以下几个方面进行改进： 1. 可减少蛋白上样量； 2. 降低一抗二抗稀释度，减少抗体孵育时间； 3. 如果背景深的话，则要把发光液沥干些再压片；如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液，比如Enlight。
阅读更多 »怎样做好荧光原位杂交实验（FISH）？
实验方法及步骤 探针变性 将探针在75℃恒温水浴中温育5 min，立即置0℃，5～10 min，使双链DNA探针变性。 标本变性 将制备好的染色体玻片标本于50℃培养箱中烤片2～3 h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。 取出玻片标本，将其浸在70～75℃的体积分数70% 甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3 min。 立即按顺序将 …
阅读更多 »蛋白质实验的注意事项
降解是蛋白质纯化过程中最害怕发生的事情。 基本规则： 划重点：做关于蛋白质的实验时，手边一定要备一个冰桶，管子从冰箱或者冷冻的状况下取出时马上放到冰上。 1. 必须冷冻离心，因为离心会产热。 2. 了解蛋白质的特性。每一个蛋白质性质差异很大，热会使你的蛋白质变性吗？有二硫键吗？能反复冻融吗？如果你不知道，那假定它不能被冷冻和再解冻是热变性的。 3. 在细胞裂 …
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