分子生物学

Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相残不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用 …

一、原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而将在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的RNA探针进行反应。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 二、仪器与试剂 仪器：  恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器 …

在体外转录法制备dsRNA（双链RNA）的过程中，确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤，以帮助确定mRNA的靶区域： 1. 目标基因的选择 首先，确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息（通常从基因数据库中获得，如NCBI）。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA（siRNA）或小发夹RNA（s …

随着亲和层析技术的发展，蛋白纯化技术相对简单，蛋白纯化技术的应用也越来越普遍，一步亲和层析即可达到90%以上的纯度。然而，蛋白纯化的过程中各个环节不容忽视。样品处理，纯化介质的选择，纯化方法的考虑，等等，虽然纯化方法简单，但是蛋白不同，采用的纯化体系也不尽相同。只要达到最终的纯化目的就是最好的纯化方法。 对于亲和层析纯化抗体，不论是蛋白A/G还是特异性抗原亲 …

本方案(Chomczynski1993) 可以从部分组织或细胞中同时提取RNA 、DNA 和蛋白质。像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一样，此方法涉及用异硫氰酸胍和苯酚的单相溶液裂解细胞。加入氯仿产生第二（有机）相，从而DNA 和蛋白质被抽提，而RNA留在水相上清中。有机相中DNA 和蛋白质的分离，通过按顺序用乙醇、异丙醇 …

问题 可能的原因 解决办法 四条泳道同一个位置都有条带，特别是靠近引物的地方 DNA 模板不纯 观察对照DNA 是否存在同样问题，如果不存在，重新制备模板DNA 试剂不纯或试剂老化；dNTP量不足 准备新鲜试剂 DNA 聚合酶活性低 使用新鲜制备的酶。 加入更多的酶，如每个反应多加4 倍。使用前再稀释酶． 将标记反应缩减至2 min, 将T7DNA 聚合酶从 …

分子信标(molecular beacon)是一种具有发夹结构的新型荧光标记核酸探针，具有高灵敏度、高特异型，其在聚合酶链反应（PCR）、核酸序列的分析、活细胞内核酸的动态检测、蛋白质(酶)与核酸的相互作用等方面具有广泛的应用。 分子信标的结构 分子信标的结构一般包括三个部分：环状区、信标茎干区、荧光基团和猝灭基团。荧光基团一般联接在信标分子的5 端；猝灭基 …

AFLP是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。本AFLP 技术主要特点 ：分析所需 DNA 量少，仅需 0.5g；可重复性好；多态性强；分辨率高；不需要 Southern 杂交；样品适用性广；稳定的遗传性。在技术特点上，AFLP 实际上是 RAPD 和 RFLP 相结合的一种产物。它既克服了 RFLP 技术复杂、有放射性危 …

酚抽提通常用来对DNA 或RNA 样品进行蛋白质的去除。酚与水不互溶，当它们混合时会形成两相，水相和酚相。当含有DNA 的水溶液与酚混合时，蛋白质会进入酚相，再将含DNA 的水相取出进行再抽提和乙醇沉淀浓缩。 一、材料 抗有机溶剂的塑料管，尝试尽可能小的体积，大多数的抽提可以在微量离心管中进行。 TE 饱和的酚：氯仿：异戊醇(25 : 24:1) 氯仿：异戊 …

答：你描述的策略（铺板加药做qPCR，转染后加药做WB）是合理的，并且遵循了两种检测方法对时间需求的不同逻辑：qPCR关注转录早期/中期，WB关注蛋白积累的中/后期。 这不是唯一方案： qPCR： 有时也可以在转染后某个时间点（如6-12小时）加药，再培养足够时间（如再培养18-36小时）后收样，总处理时间也可能达到24-48小时。这取决于药物起效速度和你想 …