在基因治疗中,核酸的有效转染依赖于基因载体的作用。这些载体保护核酸免受人体循环系统中核酸酶的降解,并将遗传物质作为治疗疾病的基因药物导入靶细胞。 一个有效的基因载体应该能够压缩目标基因,将其导入所需的宿主细胞,释放遗传物质,并使其与基因组结合。在基因转染过程中,基因载体对细胞膜的亲和力是与其转染效率密切相关的一个关键参数。 现分享一篇DNA转 …
阅读更多 »客户问:你好,如果电转以后抗性板子上一个没长,无抗的都长满了,这种情况是没电进去,需要增加次数吗,还是其他原因呢?
回答:“无抗的都长满”,说明细胞活性和数量没问题,基本排除培养条件问题。那么核心矛盾集中在质粒是否成功进入细胞并表达抗性基因。这里有几个关键排查点:质粒浓度是否足够(建议>100ng/μL)、抗性基因是否匹配(如氨苄不能用于表达AmpR的质粒)、抗性板浓度是否正确(过高会杀死阳性克隆)。 特别注意的是检查质粒纯度。实验室常用乙醇沉淀法提质粒,但残留的盐 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与甜菊渣提取物改善D-半乳糖诱导衰老小鼠的氧化应激研究
衰老被定义为是机体内部环境的稳定,生理功能和代谢过程不可避免的退化的一个过程。许多疾病与衰老有关,如帕金森病、糖尿病、动脉粥样硬化、阿尔茨海默病、骨质疏松症、骨关节炎和多种癌症。随着老龄化社会的到来,健康越来越受到重视。氧化应激是由活性氧自由基和抗氧化剂不平衡引起的生物过程,可能导致脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,最终导致死亡。科学证据表明,氧化应激在衰老过 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与人类胚胎干细胞转染研究
如今,人类胚胎干细胞中小干扰RNA(siRNA)或质粒DNA(pDNA)低转染效率已经成为遗传操作的关键问题。对于高效转染siRNA和质粒进入胚胎干细胞的方法的发展需求变得越来越迫切。现分享一篇RNA转染(Entranster)与人类胚胎干细胞转染的文献,以供参考。
阅读更多 »siRNA转染和DNA转染有什么不同?
首先siRNA由于只有二十几个碱基对,相比DNA几千上万对碱基,小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA,而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。 其次,siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果,这对于过量表达的DNA转染 …
阅读更多 »电转染时,指数衰减脉冲形式的电转条件是什么?
对于engreen的Entranster-E电转染试剂,当使用0.4cm比色杯时,大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm比色杯时,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm比色杯的电穿孔实验,测试电压范围 …
阅读更多 »SCI:调节心肌梗死的关键基因
心肌梗死是通过心肌细胞死亡诱导心脏衰竭一个重要原因。然而,唾液酸在心肌细胞凋亡中的作用机制尚不清楚。最近,大连医科大学的研究人员在关于心肌梗死的研究中发现,唾液酸转移酶siat7a是心肌梗死的重要影响因素。这项研究结果发表在最近的《Basic Research in Cardiology》杂志,可以帮助揭示心肌梗死治疗的潜在靶标。 心肌梗死(myocardi …
阅读更多 »siRNA转染答疑专题总结(下)
Q9: 刚开始做实验,准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达,不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高?另外,一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响? A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA,涉及到2个shRNA的表达和加工的问题,关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题,这就和你的载体,以及2个 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与内毒素和肺动脉狭窄研究
败血性休克的特点是血管功能障碍,凝血障碍,多器官衰竭,最后死亡。细菌感染和随之产生的内毒素(脂多糖[lps])暴露是败血症的原发原因,对lps的严重炎症反应被认为是败血症休克的重要介质。血管功能障碍,包括全身性低血压和肺动脉高压(PAH),是败血性休克的威胁生命的疾病。发现脂多糖诱导的炎症可影响肺动脉高压患者的血管内皮功能。然而,目前尚不清楚LP …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与丹参酮ii-磺酸钠和BKca通道研究
丹参酮ii-磺酸钠(ds-201)是丹参酮ii-a的水溶性衍生物,可诱导血管舒张并激活BKca通道。为了探讨ds-201在BKca通道上的作用机制,现分享一篇ECL发光液(enlight)与丹参酮ii-磺酸钠和BKca通道研究的文献,以供参考。 文献地址:https://www.nature.com/articles/aps201485
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