英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »电转染过程中易出现的问题
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构 …
阅读更多 »体外培养细胞的一般性质（五）
体外培养细胞传代规范的建立 细胞从原代培养时开始，就要建立细胞传代常规，即最好依据严格的时间表进行传代等操作，这样可以保持和监控细胞的增殖行为。若到了适合的时间，细胞还没有达到足够高的密度（即细胞没有彼此汇合），那么应增加接种密度：相反，若细胞很快彼此汇合，则应降低接种密度。理想的细胞浓度是使细胞每3~4d 更换培养液，每7d 传代。常规传代使细胞可重复标准 …
阅读更多 »细胞转染实验方法有哪些？
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »PBMC细胞可以用电转染吗
PBMC细胞（外周血单个核细胞）可以通过电转染（electroporation）进行基因转染。然而，由于PBMC细胞包括T细胞、B细胞、单核细胞和NK细胞等多种类型，且这些细胞对电转染的敏感性和效率存在差异，电转染PBMC细胞需要特定的优化。 一些关键的注意事项包括： 电转染参数：PBMC电转染的参数（如电压、脉冲时间和次数）需要根据细胞类型进行优化。通常， …
阅读更多 »如何提高siRNA细胞转染效率
为了达到高的siRNA转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RN …
阅读更多 »RNA转染效率低的原因是什么？
RNA转染效率低，可能的原因： · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »siRNA转染答疑专题总结（下）
Q9: 刚开始做实验，准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达，不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高？另外，一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响？ A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA，涉及到2个shRNA的表达和加工的问题，关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题，这就和你的载体，以及2个 …
阅读更多 »如何能够做好siRNA转染实验？
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »体外培养细胞的一般性质（四）
体外培养细胞的增殖特点 从培养时开始，培养物可从组织块培养的外迁细胞中获得，也可通过酶消化或机械方法分散组织获得。不管采用何种方法获得细胞，原代培养是一系列细胞选择过程的第一步，其最终结果是产生一个相对均一的细胞系。细胞从组织块培养中迁移出来的能力是选择的条件之一； 而对分散的细胞来说，只有那些在离散后黏附到了培养器皿底面上生存下来的细胞， 或悬浮时能存活的 …
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