已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Ch …
阅读更多 »BHK-21细胞的电转染条件是什么?
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21细胞的电转染条件是:对于0.2 cm电转杯,细胞密度为10×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为150V, 电容为950μF。对于0.4 cm电转杯,细胞密度为10×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为25 …
阅读更多 »细胞转染实验的不同方法
1.DEAE-葡聚糖。这是早在1965年出现的转染方法。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可以结合带负电的DNA分子,使得DNA复合物结合在带负电的细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克,也可能是细胞内吞作用使得DNA复合体进入细胞。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染,可重复性好,转染时要除掉血清。 2.磷酸钙共沉淀转染。最早在1973年 …
阅读更多 »人脐静脉内皮细胞的培养
体外培养的血管内皮细胞已广泛应用于血管疾病、血管修复、肿瘤血管形成等基础研究及临床研究中。体外培养的血管内皮细胞,仍可保持血管内皮细胞的特征,如表达VIII因子、怀布尔-帕拉德小体(Weibel-Palade body ) 、内皮细胞特异性抗原和IV 型胶原等,还可在三维培养体系或特定诱导条件下形成血管样结构。体外培养的血管内皮细胞生长形成单层后,会表现出接 …
阅读更多 »调控红细胞脱核机制研究
标题 The accumulation of miR-125b-5p is indispensable for efficient erythroblast enucleation 影响因子 该论文发表在《Cell Death and Disease》期刊上,2022年的影响因子为9.0,属于细胞生物学和医学领域的权威期刊。 文献概要 该研究探讨了miR-1 …
阅读更多 »监测慢病毒载体储备液中的可复制型病毒
一、试剂 完全培养基、DMEM 培养基、胎牛血清(FBS )、慢病毒载体储备液、OptiMEM-I、青霉素/链霉素( P/S ) 溶液(100×)、磷酸盐缓冲盐水( PBS )、聚凝胺(海美溴铵) ( 8mg/mL ) 、QuickTiter 慢病毒滴定试剂盒(慢病毒相关的HIV p24 )、293T 细胞、胰蛋白酶-EDTA ( 0.05%) 二、设备 培 …
阅读更多 »实验室小白篇:细胞培养用品及其准备
一、细胞培养瓶、培养皿和培养板 目前,细胞培养已很少使用传统的玻璃制品,如玻璃卡氏培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶,而多数使用一次性的塑料制培养瓶、塑料制离心管及塑料制移液管等,而且这些物品的规格也较丰富,如培养瓶T25、T75 、T150、T175 (阿拉伯数字表示培养面积),现在还出现了培养袋、普通培养板(有不同孔径的,如 6 孔、12 孔、24 孔、48 …
阅读更多 »如何制备HAT 选择培养基?
培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。 材料 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1) 含10 %胎牛血清 的RD 培养基 4X10-5mol/L 氨基喋呤(A 液;用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液) 1X10-5mol/L 次黄嘌呤/ 1. 6 X 10-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷,双蒸水配制( …
阅读更多 »怎样做好细胞电转染实验?
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞 …
阅读更多 »细胞复苏的步骤
真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内,保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的,通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养,以获得最大的生存能力,为了除去冻存时的添加剂, 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基, 37’C 预热 培养瓶 装有70 %乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …
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