细胞转染

细胞转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 1．转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂，如Entranster …

细胞密度确实会影响转染效率和蛋白表达。如果细胞密度过高，可能会导致以下问题： 营养和废物积累：高密度会导致培养基中的营养迅速消耗，废物积累增加，这会影响细胞的健康状态，进而影响蛋白表达。 转染效率降低：高密度时，转染试剂和DNA更难均匀分布，影响转染效率。 蛋白表达影响：过度拥挤的细胞状态可能导致蛋白表达效率下降，甚至可能出现表达异常。 建议： 调整转染密度 …

一般原则： 1.转染试剂对细胞有毒性。因此通常会建议在 4–6小时后更换新鲜培养基，以减轻毒性，保证细胞状态。 2.换液是否影响转染效率？ 针对你要拍荧光观察转染效率的情况： 如果只是想观察转染效率，一般建议 不要太早换液，至少等到荧光信号开始显现（通常24–48小时）再拍照。 如果细胞状态不好（明显发黄、漂浮、死亡增加），建议在 4–6小时换液，以保证细胞 …

1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好？ siRNA的沉默效果是有时效性的，在最佳的时间点观察，会得到更加明显的沉默效果，这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定，因为一个是消耗mRNA，一个是产生mRNA。对转染siRNA，在核酸水平，转染后8-48小时，即可观察到mRNA水平的逐步下降，一般来说，转染后48小时进行qRT-PCR …

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。后者外源DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。 转染技术的选择对转染结果影响也很大。磷酸钙转染技术是 …

文献标题：SARDH in the 1-C metabolism sculpts the T-cell fate and serves as a potential cancer therapeutic target 期刊：Cellular & Molecular Immunology 影响因子：21.8 概要：本研究通过泛癌单细胞转录组分析，发现线 …

1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细胞污染 细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀：将提完质粒后或者提的最后一步 …

1.设置空白对照组，检验细胞生长状态。 2.设置阴性对照组，无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂 + 阴性siRNA。 3.设置阳性对照组，无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂+ 靶向siRNA 转染管家基因，比如GAPDH 或者 Lamin A/C，之后通过western blotting 或者 mRNA quantif …

1．选择合适的转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …

可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考 …