2022年 5月 17日, 星期二
新闻

组织学

免疫共沉淀超详细操作步骤

一、准备工作 预冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机 二、操作步骤 用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS; 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶,0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶) 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下, …

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石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)详细步骤

1.取材 颈椎脱臼法处死小鼠,打开腹腔,剪取肝组织(或其他组织)。 切取的组织块不宜太大,以利于固定剂穿透,通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织,切成一小块2-3mm厚。 注意事项: (1)取材动作要迅速,不宜拖太久,以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 (2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要 …

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免疫组化的经验总结-常见问题

1、免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些? 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可 …

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电镜包埋剂应该具备哪些特征?

理想的电镜包埋剂(electron microscopic embedding media) 应具有以下性质:黏度低,易透入,聚合均匀,聚合后体积收缩小,能耐受电子轰击,高温下不变形,对细胞成分提取少,精细结构保存良好,在电镜的高倍放大下,不呈现可见结构,有良好的切割性能,有适当的反差,对人体无害等。但实际上,现在所用的各种包埋剂都各有利弊。 包埋剂的种类很 …

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石蜡切片的操作要点

组织化学中的组织切片主要有石蜡切片法、冰冻切片法和振动切片法等。石蜡切片法比较节省时间,操作容易,可切极薄的组织片(4 μm 以下,通常为6~10μm 厚的切片),能做连续切片,且组织块可包埋在石蜡中永久保存。但石蜡切片只能用于较小的组织块,不适用于大的组织块。石蜡切片法能改变组织内的化学反应,甚至使可显示的酶和其他物质(如脂类)完全丢失,或使蛋白质变性、酶 …

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免疫组化实验结果的判定原则和分析标准

免疫组化实验结果的判定和分析,就实验结果而言,免疫组化技术主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供。 免疫组化结果的判定原则: ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内;EMA应定位在细胞膜上等等。 …

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石蜡包埋法如何选择石蜡?

石蜡包埋法是组织学制片中最常用的方法、石蜡(paraffin)是由石油中分离出来的一种甲烷, 系固体碳化氢, 呈蜡样半透明的结晶块状。切片用石蜡应选优质的品种, 要纯而透明, 并有适当黏性。根据熔点的不同,有软蜡和硬蜡之分,软蜡的熔点为52~56°C ,硬蜡为60~62°C 。在室温高时用硬蜡,室温低时用软蜡;薄切片宜用硬蜡, 厚切片宜用软蜡。新蜡内含气体, …

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免疫组化技术大全

一、免疫组织化学简介 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体 …

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包埋剂的配制及注意事项

1. 包埋剂的配制 (1) 配方Ⅰ : 环氧树脂618 10 ml 十二烷基琥珀酸酐(DDSA) (硬化剂) 5 ml 甲基内次甲基二甲酸酐(nadic methyl anhydride, MNA) (硬化剂) 8 ml 苯二甲酸二丁酯(DBP) (增塑剂) 3 ml 2, 4, 6-三(二甲氨基苯酚) ( DMP-30) (加速剂) 0. 2 ml (2) …

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冰冻切片法详细步骤

冰冻切片法是组织化学,特别是酶组织化学最常用的切片技术,固定或未固定的组织样品均可进行冰冻切片,新鲜组织冰冻切片对组织细胞内酶类保存最佳,尤其对热、酸、碱、有机溶剂等耐受能力弱的酶和化学物质更加适用。冰冻切片也是免疫细胞化学研究中常用的切片方法,能够较完好地保存多种抗原,尤其是表面抗原的抗原性。 在冰冻切片中,组织中水分易形成冰晶,往往影响酶和抗原的定位。一 …

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