2024年 4月 17日, 星期三
新闻

组织学

如何制作石蜡切片(H.E.对染法)?

一、实验原理: 石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色,细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉 …

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PI染色与流式细胞术

流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面,用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析,可区别多种细胞的特性,为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。 流式细胞术最大的特点是能在保持 …

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免疫共沉淀超详细操作步骤

一、准备工作 预冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机 二、操作步骤 用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS; 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶,0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶) 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下, …

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免疫组化技术大全

一、免疫组织化学简介 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体 …

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包埋剂的配制及注意事项

1. 包埋剂的配制 (1) 配方Ⅰ : 环氧树脂618 10 ml 十二烷基琥珀酸酐(DDSA) (硬化剂) 5 ml 甲基内次甲基二甲酸酐(nadic methyl anhydride, MNA) (硬化剂) 8 ml 苯二甲酸二丁酯(DBP) (增塑剂) 3 ml 2, 4, 6-三(二甲氨基苯酚) ( DMP-30) (加速剂) 0. 2 ml (2) …

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石蜡切片的操作要点

组织化学中的组织切片主要有石蜡切片法、冰冻切片法和振动切片法等。石蜡切片法比较节省时间,操作容易,可切极薄的组织片(4 μm 以下,通常为6~10μm 厚的切片),能做连续切片,且组织块可包埋在石蜡中永久保存。但石蜡切片只能用于较小的组织块,不适用于大的组织块。石蜡切片法能改变组织内的化学反应,甚至使可显示的酶和其他物质(如脂类)完全丢失,或使蛋白质变性、酶 …

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石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)详细步骤

1.取材 颈椎脱臼法处死小鼠,打开腹腔,剪取肝组织(或其他组织)。 切取的组织块不宜太大,以利于固定剂穿透,通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织,切成一小块2-3mm厚。 注意事项: (1)取材动作要迅速,不宜拖太久,以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 (2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要 …

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免疫共沉淀经验总结分享

免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …

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免疫组化的经验总结-常见问题

1、免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些? 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可 …

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电镜包埋剂应该具备哪些特征?

理想的电镜包埋剂(electron microscopic embedding media) 应具有以下性质:黏度低,易透入,聚合均匀,聚合后体积收缩小,能耐受电子轰击,高温下不变形,对细胞成分提取少,精细结构保存良好,在电镜的高倍放大下,不呈现可见结构,有良好的切割性能,有适当的反差,对人体无害等。但实际上,现在所用的各种包埋剂都各有利弊。 包埋剂的种类很 …

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