2022年 12月 9日, 星期五
新闻

蛋白和酶

14-3-3蛋白家族与精神分裂症

精神分裂症是一种使人衰弱的精神障碍,影响着世界上大约1%的人口,但人们对这种疾病并不是十分了解。精神分裂症的遗传学是非常异质的,因此很难确定可能导致这种疾病的具体改变。然而,越来越多来自人类研究的证据表明,14-3-3家族的改变与精神分裂症之间存在联系。 2022年3月14日,发表于Frontuers in Molecular Neuroscience 的一 …

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western-blot化学发光(ECL)出现高背景是什么原因?

做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清楚“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。     影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充 …

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western-blot化学发光为什么会出现高背景?

     做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清楚“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。     影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝 …

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Western blot实验最常见的10个问题及解决方案

1、Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用下,由大到小的进行排列,利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体(一抗)特异性识别并与之结合。在此基础上,酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗,通过与底物反应显色来观察目的蛋白。 Westernblot显色的方法主要有以下几种:(1)放射自显影,(2)底物化学发光E …

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蛋白质浓度的测定

通常用的蛋白质浓度测定方法是Bradford 、BCA 以及在280 nm 处的光吸收。实验室倾向于选择一些特定的方法,在订购新的试剂前先试用实验室的常规方法。Brad ford法是最好的一种可以用来满足所有目的的方法。 不能直接用一种方法的结果与另一种方法进行比较,必须相对浓度来比较,例如,用Bradford 法测量到的牛血清清蛋白的量比其称量的值高两倍。 …

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蛋白质分离实验——细胞裂解方法

当分离蛋白质时,包含有蛋白质的细胞和细菌须先被裂解。物理法裂解。利用各种机器来完成,例如:1. 氮气气穴弹。氮气解压是裂解真核细胞的一种温和方法,存在于一定压力下的氮气与细胞内的氮气达到平衡。释放压力时,溶液中产生的氮气和间歇的气泡导致单个细胞膜的破裂,但不再有进一步的细胞裂解发生,细胞器还是保持完整,而且氮气产生的压力和气温降低都会保护蛋白质不被降解。2. …

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限制酶和DNA 甲基化酶

限制酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA 序列之内或其附近的特异位点上,井在此切割双链DNA 。它可分3 类,分别是第一型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。 I 类和Ⅲ类限制酶在同一蛋白质分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP 的限制(切割)活性。Ⅲ类限制酶在识别位点上切割DNA ,然后从底物上解离。 …

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蛋白质凝胶电泳注意事项

大多数蛋白质凝胶电泳是还原性条件下的十二烧基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE) 。 *样品准备 还原试剂2-巯基乙醇或者二硫苏糖醇加在变性胶的样品缓冲液中,还原蛋白质中的二硫键,确保蛋白质维持在测定分子量所需的无规则卷曲状态。 样品缓冲液分成小管,贮于-20℃ 。甘油浓度很高,足以防止样品冻结,所以不必担心冻融所造成的损伤。当管中没有还原试剂的味 …

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