western-blot实验过程常见问题

常见问题                                                                            解决对策

两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平                        玻璃没有洗干净，应该洗得很干净
                                                                              过硫酸铵和TEMED加量相对较多
                                                                                      加完试剂后应摇匀

总是漏胶                                                               避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损
                                                              将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面

膜上有明显气泡                                                  操作时将气泡完全排除
                                                                           靠膜一侧的滤纸应铺平

特异性低                                                                                优化一抗
                                                                                提高一抗和二抗的稀释度
                                                                               降低SDS-PAGE中蛋白的上样量

背景高                                                                               优化封闭液
                                                                   优化洗涤缓冲液，增加洗涤次数
                                                                                   减少曝光时间


信号低                                                                                   优化一抗
                                                                                            浓缩样品
                                                                       选择更高灵敏度的发光液，如enlight等。