使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列,以验证实验siRNA的特异性。同时也验证,针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
阅读更多 »电转染实验时,对于方波形式的脉冲条件是什么?
一般来说,方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定,即在保持电容不变的情况下,将脉冲长度减半,电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件,可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。当使用0.4cm电转杯时 …
阅读更多 »CCK8实验中,细胞已经死亡,但是脱氢酶的活性还在,是否能计算细胞数量?
不能。由于CCK8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量,如果细胞已经死亡,但脱氢酶的活性还在,则试剂测定的细胞数量将会比真实值高,不能真实反映活细胞数量,建议采用别的方法测定。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/ …
阅读更多 »电转染实验时,DNA有什么要求?
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …
阅读更多 »电转染实验时,对于指数衰减形式的脉冲条件是什么?
对于Entranster-E电转染试剂,当使用0.4cm电转杯时,大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm电转杯时,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm电转杯的电穿孔实验,测试电压范围为200–30 …
阅读更多 »电穿孔实验时的细胞密度是多少?
确定每种细胞类型的最佳细胞密度,以使电穿孔效率最大化。在含电转试剂的终体系中,电穿孔时的细胞密度一般在1-10×10^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞,最好是接近10×10^6细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞,建议的细胞密度为1-5×10^6细胞/ml。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com …
阅读更多 »电转染实验,如何设置正确的siRNA实验对照组?
1.设置空白对照组,检验细胞生长状态。 2.设置阴性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂 + 阴性siRNA。 3.设置阳性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂+ 靶向siRNA 转染管家基因,比如GAPDH 或者 Lamin A/C,之后通过western blotting 或者 mRNA quantif …
阅读更多 »电转染后细胞孵育时间是多少?
每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染,最佳孵育时间一般为12-48小时,具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation
阅读更多 »CCK8试剂盒应用范围
CCK8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »CCK8实验中吸光度值太高,如果不减少细胞数量,如何解决?
可以缩短加入CCK8后的培养时间。例如:可以把加入CCK8 试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
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