血清可以提供细胞生长所必需的生长因子和营养元素，某些细胞特别是转化后的细胞，对于血清的需要量是很低的，在0.5 ％左右。有些细胞被“培养成“只生存在低血清浓度的培养基中。由于细胞生长所需的物质已经被完全定性，所以更多的细胞是被培养在添加有特定物质的基础培养基中。如果细胞能够生存在不添加血清的培养基中则是一种比较幸运的情况。 使用血清的时候有一些参数要注意： …

大多数实验室购买的培养基是预先处理好的瓶装液体培养基，或者是干粉状的需要水化和过滤除菌的培养基，后者比较便宜，用量大时更有价值。 由于培养基中都有酚红或其他染料pH 指示剂，虽然外观看上去都差不多，但事实上它们并不一样，所以千万不能用错。 添加有酚红pH指示剂的培养基的颜色 pH6.5 以下为拧檬黄 pH6.5 为黄色 pH7.0 为橙色 pH7.4 为红色 …

大多数实验室使用抗生素，但是如果无菌操作技术掌握得很好，抗生素其实也不是必需的。多数抗生素在37°C 时的半衰期都很短，培养基内实际的抗生素浓度要比你以为的低。 细胞培养所用的抗生素通常以干粉形式保存，使用前用无菌水或其他溶剂将其溶解，得到的抗生素溶液可以不需要再进行过滤除菌。 细胞培养的两种标准抗生素 庆大霉素，储存液浓度5-10 mg/ml, 工作浓度为 …

持续传代的细胞株有更高的生长速率、克隆效率、成瘤率和更多的染色体组型。 持续传代细胞株经常被改造成所需的独特表型。 细胞株分化度越高，它的生长也就越慢。 常用的细胞株 细胞株 细胞类型和来源 贴壁或悬浮培养 3T3 成纤维细胞（鼠，胚胎） 贴壁培养 BHK21 成纤维细胞（叙利亚仓鼠，肾脏） 悬浮培养 MDCK 上皮细胞（狗，肾脏） 贴壁培养 ES 胚胎干细 …

给养  （给予新鲜的培养基） ，细胞生长过程中会消耗培养基中的某些必需因子，必须更换培养基。 分瓶  （传代、细胞数批减少），细胞数量不断增长，超出容器和培养基的负荷。（PS: 培养和传代是同时进行的，很难只进行一个而不进行另一个操作。） 冻存    细胞株都必须分装冻存样品。可以作为备用，防止细胞表型的漂变 …

根据细胞在液体或半固体培养基中的生长情况分类，生长特征只是功能上的描述，并与细胞来源有关。 悬浮和贴壁生长是细胞的特性和培养条件，有些细胞可以以两种方式进行。   图1 制备分泌抗特定抗原X 的单克隆抗体的杂交瘤细胞筛选培养基中加入了氨甲啋呤抑制剂，可以抑制核昔酸正常生物合成的药物，所以细胞必须采用其他途径合成核酸，而只有杂交瘤细胞株可以采取这种途径合成核昔 …

根据来源分类 原代细胞分离于动物或植物的组织，经培养获得。细胞一旦分裂就成为有限传代细胞株，并且有可能变成无性增殖化细胞。把正常细胞来源的有限传代细胞株持续传代，筛选出快速生长的细胞，就有可能把有限传代细胞祩转变成持续传代的细胞株，这个操作就是自然转化。   来源   与组织相溶性 维护 加倍 原代细胞 动物组织、胚胎或成体 典型 难 0 …

贴壁细胞 正常情况下观察到的细胞应该是规则均匀分布在培养皿底面上的一层细胞。每种细胞都有其自身的形态特征：球形、三角形、方形、长形等等。细胞的生长方式有些像鹅卵石铺成的路面、有些呈液涡状、有些是随机形态、而有些则覆盖了另一些细胞。 在单个细胞中能够发现一个比较暗的圆形细胞核，其内还有更暗的核仁。有时核仁大得把细胞质挤成很小的一块。分裂时期细胞核可能成半球状或 …

培养细胞后，要时刻观察我们的细胞，无论是用眼睛还是显微镜观察，我们要了解他们的状态，每个实验的培养条件不同，只有时刻了解他们，及时调整，才能做好后续实验。 划重点: 必须熟悉培养的细胞的正常形态，每当拿到一个新的细胞株时，要尽可能多的观察并熟悉细胞的正常生长情况。 当我们从培养箱中拿出细胞培养瓶时: 1.注意看培养基的颜色。多数培养基中都有酸碱指示剂，偏酸性 …

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂， 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基， 37’C 预热 培养瓶 装有70 ％乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …