英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
慢病毒属于反转录病毒科，与该科其他病毒一样，病毒粒子携带ssRNA, 必须反转录并整合至宿主细胞基因组（原病毒）产生有效感染。慢病毒的显著特点是其基因组复杂、圆柱形或圆锥形的核衣壳携带病毒基因组。核衣壳被携带包膜糖蛋白的双层膜包裹，包膜糖蛋白负责与细胞表面受体进行相互作用及进入宿主细胞。反转录病毒是几乎所有脊椎动物的主要病原体。人类免疫缺陷病毒l 型（HIV …
阅读更多 »AAV 载体
腺相关病毒（AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒，无包膜，直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒，因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒，如腺病毒共感染时，它的天然复制能力缺失，与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »什么是腺病毒载体？
腺病毒属于腺病毒科，分为两个属：禽腺病毒属（鸟腺病毒）和哺乳动物腺病毒属（人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒）。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组，由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
阅读更多 »监测慢病毒载体储备液中的可复制型病毒
一、试剂 完全培养基、DMEM 培养基、胎牛血清（FBS )、慢病毒载体储备液、OptiMEM-I、青霉素／链霉素( P/S ) 溶液（100×)、磷酸盐缓冲盐水( PBS )、聚凝胺（海美溴铵） ( 8mg/mL ) 、QuickTiter 慢病毒滴定试剂盒（慢病毒相关的HIV p24 )、293T 细胞、胰蛋白酶－EDTA ( 0.05%) 二、设备 培 …
阅读更多 »慢病毒载体的滴定
一、试剂 完全培养基、DMEM 培养基、胎牛血清（FBS)、慢病毒载体储备液、多聚甲酸( 4%) （ 可选；见步骤15)、青霉素／慢病毒滴定试剂盒链霉素溶液( P/S ) （100 ×)、磷酸盐缓冲盐水( PBS )、聚凝胺（海美溴铵） ( 8mg/mL) 、QuickTiter （慢病毒相关的HIV p24 )、293T 细胞、胰蛋白酶－EDTA ( 0. …
阅读更多 »高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备
一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇（或异丙醇） (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 ％青霉素／链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备
一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶（容量为1或2L） 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl 0.5g 去离子水 950ml 250mmol/L KCl溶液 10ml 以5N …
阅读更多 »Green先生的科研生活手记(1)
原创文章，转载请注明出处。 第一章 我的硕士课题竟然需要女友来拯救 生物硕士苦啊，2年多了。课题仍然停滞不前。 话说我是一枚研究大脑基因功能的小硕，具体研究的是大脑某神经相关基因的功能，这个基因的功能事关人的智力认知，研究好了，会造福人类，想想真是激动啊。 可想想我的研究，却一点也无法激动。实验卡住了，卡住了……，拯救愚蠢的人类不容易 …
阅读更多 »Green先生的科研生活手记(4)
原创文章，转载请注明出处。 孩童的无知无畏 苏格拉底说，“孩子在成人眼里是幼稚的，而成人在上帝眼里也是幼稚的”。 我想说，对生命科学的了解越多，我越觉得自己的浅薄无知，对生命也越敬畏。这也是我对生命科学研究爱恨交织的原因。 对大自然，或者生命，我们必须有非常敬畏的态度，生命不是稍纵即逝的感受，而是永恒的，虽然我们每个个体只能经历其中一小段。我们必须非常小心谨 …
阅读更多 »直接克隆法构建重组腺病毒基因组
pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …
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