2024年 11 月 4日, 星期一
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shRNA转染后,什么时候做RT-PCR最好?

shRNA转染后,进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素,包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说,在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说:

  1. 24小时后:在这个时间点,可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA,这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。
  2. 48小时后:这是一个比较常见的时间点,此时大多数shRNA会有较高的表达水平,目标基因的降解也比较明显。对于大多数实验,48小时是一个不错的时间点进行RT-PCR检测。
  3. 72小时后:对于一些目标基因降解较慢或者shRNA表达较慢的情况,72小时后进行RT-PCR检测可能会更合适。在这个时间点,基因沉默的效果通常更为显著。

为了确定最佳时间点,建议进行一个时间梯度实验,即在不同的时间点(如24小时、48小时、72小时等)取样并进行RT-PCR检测,比较目标基因的表达水平,从而选择最佳的检测时间点。

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