2022年 5月 17日, 星期二
新闻

单克隆细胞培养上清的制备

材料

  • 杂交瘤
  • DMEM-10 完全培养基
  • 175 cm2 组织培养用细颈瓶
  • 50ml 塑料锥底离心管,无菌
  • 离心机和转子

过程

1. 将杂交瘤细胞移入含有DMEM-10 完全培养基的175 cm2 培养瓶中。培养至生长旺盛和准备细胞分瓶时取用(细胞密度应达到 1X106 ~ 2X106 个细胞/ml) 。避免细胞生长密度过高导致死亡。

2. 以1 : 10 的比例分出部分细胞至另一个175cm2 培养瓶中。加入DMEM-10 完全培养基至总体积100ml, 培养至细胞过度生长,培养基呈黄色(酸性),出现死亡细胞(大约5d) 。或者,将高密度细 (1X106~2X106 个细胞/ml) 随新鲜培养基转入培养瓶,培养2~3d 直到出现死亡细胞。

3. 将培养瓶内容物转入50ml 锥底离心管。室温下, 1500g 离心10min 。取上清,弃沉淀。

4. 用适当的方法检测上清液中MAb 的滴度。

5. 无菌环境储存培养上清;通常4℃中可以储存数周到数月,-20℃ 中可以储存至数年,在 -70°C 可以永久储存。可将培养上清等分为多个单位储存。尽量减少解冻和重新冰冻的次数 。

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