2022年 8月 20日, 星期六
新闻

转化细胞在软琼脂中的生长

恶性转化的细胞在许多方面不同于其相应的正常细胞,主要不同在于它们失去了接触抑制生长,获得永生性和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外检测细胞转化和致瘤性的替代方法。

材料

  • 2% (w/ v) 琼脂
  • 基础营养培养基,如DMEM ,含24. 6 %和20% (v/ v) 胎牛血清
  • 单细胞悬液
  • 12 孔培养板
  • 15ml 聚碳酸酣锥形离心管 ,灭菌
  1. 对于每一组重复孔将2. 5ml 的2 %琼脂与9. 75ml 含24.6 %胎牛血清的培养液混合制成含0. 375 %琼脂、20 %胎牛血清的培养液,各取2ml 分别注入5 支15ml 聚碳酸酷锥形离心管, 45°C 温浴。

  2. 将管分开,分别在含20 % FBS, 终容积为o. 5ml 的培养基中加入50 、100 、200 、500 和1000 个细胞。再准备另一组试管为重复培养用。分别将各浓度细胞悬液与步骤1 的琼脂混合,迅速注入12 孔培养板,置于37°C 湿润的CO2 培养箱孵育,直至长出细胞集落。

  3. 倒置相差显微镜下计数5 次倍增后至少有3 2 个细胞的集落数,计算集落形成率(形成集落的贴壁细胞百分数)。

推荐

如何制备HAT 选择培养基?

培养基可用来有意识地从混合细胞 …

发表回复

您的电子邮箱地址不会被公开。