2024年 7月 23日, 星期二
新闻

悬浮细胞的培养

材料

  • 装在冷冻培养瓶中的HeLa S3 细胞
  • 70%(VIV) 乙醇
  • 完全MEM-10 培养基, 37°C
  • 胰蛋白酶/EDTA, 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶/0. 02% (m/V)EDTA, 37°C
  • 转瓶完全培养基-5, 37°C
  • 25 cm2 组织培养瓶
  • 湿润的、37°C 、5%CO2 培养箱
  • Sorvall H-6000A 转头(或相当的)和50 ml 离心管
  • 100 ml 或200 ml 通气转瓶和带滤器的盖
  1. 在37℃水浴中融化一支冷冻HeLa S3 细胞的培养瓶,用70%乙醇将培养瓶口消毒,打开培养瓶,用移液管将细胞移入一个25 cm2 的组织培养瓶(装有5 ml 完全MEM-10 培养基)中,转动培养瓶,使细胞均匀地分布,放入湿润的5% CO2 培养箱中37℃培养过夜。
  2. 吸出起始培养基,用0. 5 ml 37℃ 胰蛋白酶/EDTA 覆盖细胞,静置30~40 s 。
  3. 加入10 ml 转瓶完全培养基-5, 将细胞移入一个50ml 的离心管中,室温下, 1800 g(Sorvall H-6000A 转头为2500 r/ min) 离心5 min, 弃上清。
  4. 加入5 ml 转瓶完全培养基-5 ,用吸管来回吹打细胞悬液几次,以分散细胞团块,将悬液移入一个含有50 ml 转瓶完全培养基-5 的100 ml 或200 ml 通气转瓶中。
  5. 取出1 ml 细胞悬液,用血细胞计数器计数细胞,加入转瓶完全培养基-5, 使培养物密度达3 X105~4 X105 个/ml。将细胞放入不含CO2 的37℃培养箱中旋转培养。
  6. 让细胞生长2 天,每天进行细胞计数并加入转瓶完全培养基-5, 使培养物浓度维持在3X 105~4 X 105 个/ml 。
  7. 取出1 ml 细胞悬液,用血细胞计数器计数细胞,当密度达到3X105~4X105 个/ml时,用转瓶完全培养基-5 稀释细胞到1. 5X105 或2. 5X105 个/ml, 分别于隔日或每天加入。
  8. 将一个100 ml 或200 ml 通气转瓶(分别含有50 ml 或100 ml 细胞)放入不含CO2的37°C 培养箱中旋转培养,每1~2 天传代一次,将细胞密度维持在1. 5X105~5X105个/ml 。

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