2024年 7月 15日, 星期一
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培养基中pH 的调节

大多数细胞系增殖的最适pH 为7. 4, 当培养液逐渐变酸或变碱时,细胞的活力和增殖率将呈下降趋势。培养液必须缓冲细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺所产生的CO2 及乳酸。人们曾一度用碳酸氢盐、HCO3与空气中CO2 共同构成一个缓冲体系,碳酸氢盐的低pka(pka=6. 1) 在pH7. 4 左右产生微弱的缓冲效能。无毒缓冲剂,如PIPES(pka=6. 8), MOPS (pka= 7. Z), TES (N-tris [hydroxymethyl] methyl-Z-aminoethanesulfonic acid,pka=7. 5), HEPES(pka=7. 55) 在pH 6.0~8. 0范围内有效,更为科研工作者所常用。浓度为10~25mmol/L 的HEPES 是无血清培养基的标准缓冲体系,但它是额外添加的,不能替代碳酸氢盐和CO2 缓冲系统。培养基中常加酚红作为一种指示剂,它可提供肉眼可见的评估酸碱度的指标,随pH 下降,颜色由红变黄: pH7.4 时呈红色,pH7.0 时呈橘红色, pH6. 5 时呈黄色,当pH 上升时又变为浅紫色(pH7. 6) 和紫红色(pH7. 8) 。当酚红从橘红色变为黄色,表明培养液乳酸堆积,要及时更换。

材料

  • 不含NaHCO3或HEPES 的粉末状培养基
  • HEPES
  • NaHCO3

    1. 用水溶解粉末状培养基并轻轻搅拌。加入HEPES (分子质量238.3) ,使之终浓度为15mmol/L, 搅拌直至溶解。按照推荐浓度将NaHCO3 加入到基础营养液中,搅拌备用。加其他培养基组分并调pH 至7.4
    2. 培养基过滤除菌
    3. 当完全培养基与温箱的温度、CO2 浓度相平衡时,调整pH

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