2022年 1月 28日, 星期五
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细胞的支原体检测——培养法

此种方法最为可靠且成本低廉, 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。

(一)材料与设备

1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂,蒸馆水配制, 高压除菌(加20%胎牛血清)。
2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂,蒸馆水配制,高压除菌(加20%胎牛血清)。
3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管/皿、37°C 培养箱。

(二)操作步骤

1. 样品的储存。样品取材后,最好尽快进行检测。样品如在24h 以内进行支原体检测, 可储存在2~8℃; 如果超过24h 样品应放置于-20℃ 以下保存。-20℃保存的样品,进行检测时需重新加入到对照培养细胞中,培养72h 后,取上清直接进行接种检测。
2. 准备精氨酸肉汤培养基、支原体琼脂培养基(半流体)。
3. 将样品分别接种到10ml 精氨酸肉汤培养基、半流体培养基中(已冷却至36℃) ,每支培养基接种样品0.5~ 1.0ml. 每种样品接种6 支精氨酸肉汤培养基,3 支半流体培养基。
4. 接种6d 后,取3 支精氨酸肉汤培养基中样品0.5 ~ 1.0ml. 复种于精氨酸肉汤培养基中。
5. 36 ℃ 培养29d, 每隔3d 观察一次。记录实验结果。

(三)结果判断

培养结束时,精氨酸肉汤培养基如有支原体生长,则液体颜色改变(粉色或黄色) 。
半流体培养基中如有支原体生长,则出现絮状沉淀

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