2022年 8月 17日, 星期三
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如何快速实现蝗虫、七鳃鳗、猪等(非小鼠)动物的体内基因敲除/表达?

如何快速实现蝗虫、七鳃鳗、猪等动物的基因敲除呢?

如果实验室研究人体疾病基因,需要稳定表达时,我们可能会选择基因工程小鼠,但如果课题组研究的是其他哺乳动物,比如猪、蝗虫、鱼之类的,基因工程的工作就相对复杂了。首先要设计基因载体,然后打入靶细胞进行同源重组,再培养细胞、筛选……一套工夫下来,要不目的基因没重组,要不模型全死了。要不找公司做?老牌的公司构建基因工程小鼠都得六个月,两个月构建载体,两个月打靶筛选,两个培养。如果出现杂合子就得加期,关键价格还贵。现在大部分公司都是批量化的生成基因工程小鼠模型,对于大型哺乳动物的基因敲除/表达模型还处于探索阶段,也就以为着做这些模型比小鼠更贵,花的时间更长。经费有限,时间有限,的确是不敢轻易尝试。但只做细胞,不做动物实验,难发文章啊……

如果有办法能时间短又花费少的做这些动物的基因敲除/表达就好了。

实际上,的确有这种方法。

发表在《Development》上的一篇题为“The microRNAs let-7 and miR-278 regulate insect metamorphosis and oogenesis by targeting the juvenile hormone early-response gene Krüppel-homolog 1”的文章中表述:将agomiR与体内RNA转染试剂(Engreen)混合处理后,在蜕皮24小时内的4龄若虫和成虫出现后12小时内的成年雌性分别腹腔注射0.5 nmol和1 nmol agomiR,qPCR实验表明实验组miR-278和let-7的表达水平显著上升。

发表在《COMMUNICATIONS BIOLOGY》期刊上题目为“MicroRNA expression profile in Lampetra morii upon Vibrio anguillarum infection and miR-4561 characterization targeting lip”的论文写道:根据制造商的说明,使用含有 10% 葡萄糖的 Entranster(Engreen,北京,CHN)试剂将 miR-4561 模拟物、抑制剂和 NC 转染到七鳃鳗的神经上体组织中,并通过 miR-4561的 qRTPCR 评估转染效率,注射mimic组的miR-4561表达较对照组显著上升,注射inhibitor组的表达较对照组显著下降。

发表在《Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics》期刊上题目为“Coronary Microembolization Induces Cardiomyocyte Apoptosis in Swine by Activating the LOX-1-Dependent Mitochondrial Pathway and Caspase-8-Dependent Pathway”文章中描述: 将总质量为 300 mg 的 LOX-1 siRNA 或对照siRNA用 600 mL 转染试剂(Entranster-in vivo;Engreen)通过上下吹打溶液充分混合。 然后通过1.8F输液导管将混合物注入猪的LAD动脉,然后通过1.8F输液导管将混合物注入猪的LAD动脉,然后注射2mL生理盐水。实验组的LOX-1蛋白表达显著下降。

  

 

综上,体内转染试剂帮我们排除课题对象的障碍,实现体内基因的有效敲除/表达,助力动物研究迈入更深层次的领域。

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