DNA分离前你应该知道的那些事

DNA 是相当稳定的。这也是保存和传递遗传信息所必须具备的但是不能因此而太随意,DNA的污染来源主要是其他DNA 。

DNA 分离

  • 分离的DNA可以是基因组的也可以是染色体组外的。
  • 研究DNA 分离试剂盒,这些试剂盒可以是针对基因组的和染色体组外的DNA、从琼脂糖凝胶中分离DNA或者从PCR产物中抽提DNA。他们利用一些结合DNA的树脂或者滤膜,通常是一些小的离心柱,可以避免酚抽提和CsCI 超离心。
  • 染色体组外的DNA作为噬菌体或质粒DNA抽提出来。
  • 大片断的DNA, 比如说基因组DNA必须小心操作,以防止断裂,其抽提和储存不同于小片断DNA 。
  • DNA 制备可分为小量、中量和大量制备, 小量制备就可以满足大多数的使用要求。
  • DNA的质量鉴定是需要的。有些过程比如DNA测序或者转染哺乳动物细胞需要高质量的DNA , 而其他操作如限制性图谱筛选克隆,对DNA 的质量要求不十分严格。

测定的单位

1 kb DNA = 6. 5 x 105 Da 的双链DNA (钠盐)

1 kb DNA = 3.3 x 105Da 的单链DNA (钠盐)

1 kb DNA = 3.4 x 105Da 的单链RNA (钠盐)

1 kb DNA = 37000Da = 333 个编码氨基酸

1 个脱氧核糖核昔酸碱基的平均分子量= 324.5 Da

1 个脱氧核糖核昔酸碱基对的平均分子量·= 649 Da

1 μg/ml 的1 kb DNA = 3.08 nmol/L 5‘端

1 μg/ml 的DNA= 3. 08 μmol/L 磷酸盐

表 1 基因组DNA

物种 碱基对/单倍体基因组 单拷贝基因的拷贝数量
大肠杆菌

4.7X 106bp

1.8X108

果蝇

1.4X 108bp

6.6 X 105

小鼠

2.7X 109bp

3.4 X 105

3.3X 109bp

2.8 X 105

 

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