色谱法分离蛋白质

色谱

与DNA 和RNA 一样,蛋白质可以进行常规的分离,或者用色谱法来分离。主要用的色谱法是凝胶过滤、

离子交换层析和亲和层析。

1.  凝胶过滤,基于分子的大小对物质进行分离。

       工作原理:固定相中包含有很多的孔,只有较小的分子才可以进入。

      填料:葡聚糖(交联右旋糖苷)、Sephacryl (烯丙基葡聚糖和N, N-亚甲双丙烯酰胺交联共聚物)、

琼脂糖。

      实例:用G50 的柱子去除切口平移反应中那些没有参与反应的核苷酸

2.  离子交换,基于物质的电荷特性分离。

       工作原理:将蛋白质或者其他带电物质通过电荷连接在固定相上,用较高离子强度的缓冲液来洗脱。

柱子的填充物可以是阴离子、阳离子或者两者都有。

       填料: DEAE 纤维素、唬石(amberlite) 、Dowex 、CM琼脂糖。

       实例:在DEAE 薄层上分离凝胶电泳的DNA 样品。

3.  亲和层析,基于物质的天然结合进行物质分离。

      工作原理:分子的纯化具有专一性,可以通过固定相上的配体可逆地吸附。

      填料:寡聚核苷酸(dT) 纤维素、生物素、肝素。

      实例:抗体与蛋白 A 的结合。

注意:许多层析填料在使用前都需要浸泡溶胀,否则不能有效的工作,有一些还需要在缓冲液中放置过夜。

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