PCR （多聚酶链式反应）

PCR 是1985 年由Kary Mulis 在Cetus 公司发明的，是一种体外复制和扩增DNA的方法。

DNA模板首先在高温下变性，当温度降低时，DNA 两侧的寡核苷酸引物与互补序列结合，在DNA聚合酶作用下，随着温度的缓慢提升，引物逐渐延伸，两条引物之间的区域被合成。然后DNA再次变性，引物再次结合，DNA的合成再次进行，这样周而复始，重复20 – 50 次。

一个温度循环装置或可编程序的水浴锅，可以获得整个过程所需要温度的迅速变化。所用的DNA聚合酶是Taq DNA 聚合酶，它来自嗜热菌Thermus aquaticus, 能在高温下工作。整个过程非常简单，问题是任何被污染的DNA都可能被扩增，有时甚至会超过所期望的模板。

一种DNA被另一种DNA污染是PCR 工作者的祸害，这种DNA 片段扩增的可能会导致祥品制备的DNA很容易出现虚假的条带。

 

PCR实验室中常见的污染来源是前一次PCR过程的产物DNA, 它易在移液和PCR操作中产生气溶胶。正因为这样，许多实验室有一个单独的样品制备区，远离PCR仪和任何PCR 产物可能被暴露的区域。另一个污染源来自皮肤细胞。操作时需要戴上手套。

PCR 的基本法则

• 远离PCR仪进行样品制备。多数实验室有一个独立的样品制备区，远离PCR仪。无论有没有专门的样品制备区，绝不要在PCR仪附近制备样品。尝试建立一套关于样品制备的严格规则。
• 配制PCR 反应的移液器和其他的移液器分开使用。正置的移液器会防止气溶胶和样品的交叉污染，带有滤膜的移液头也能防止样品之间的污染。
• 戴手套。经常更换手套能帮助防止来自表皮细胞的污染。
• 在反应管内最后加入DNA