英格恩技术博客 专注转染等实验

流式检测细胞周期实验步骤

1. 细胞培养:

取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。

2. 细胞固定:
800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。
3. 细胞染色:

1500rpm离心5min,弃上清,以3mL的PBS洗涤一次,加入400uL的CCAA溶液(PI染液,engreen),100ul RNase A(100ug/mL ),4℃避光孵育30min。

4. 流式分析:
以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2~3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

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