世界上最遥远的距离不是天涯海角,而是我天天和你在一起,你却不了解我。 荧光定量PCR常做,相关概念常说,可它们到底啥意思? 荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念 基线(Baseline):是指在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大。接近一条直线,这样的直线即是基线。 荧光域值(threshold)的设定:一般将 PCR …
阅读更多 »Real-Time qPCR常见的八大问题分析
1. 无Ct值出现 检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。 模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。 模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。 Ct值出现过晚(Ct>38) 扩增效率低: 反应条 …
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