由此可见,在转染各类细胞系时,Entranster-E具有明显的优势,是一款比较理想的电转染试剂。
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验?
要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内 …
阅读更多 »电转染实验的建议
关于细胞的电转染实验,现提出以下几点建议供大家参考: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »电转染实验时,siRNA有什么要求?
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列,以验证实验siRNA的特异性。同时也验证,针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
阅读更多 »电转染实验,如何设置正确的siRNA实验对照组?
1.设置空白对照组,检验细胞生长状态。 2.设置阴性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂 + 阴性siRNA。 3.设置阳性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂+ 靶向siRNA 转染管家基因,比如GAPDH 或者 Lamin A/C,之后通过western blotting 或者 mRNA quantif …
阅读更多 »细胞电转染实验的几点建议
1. 电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …
阅读更多 »电转感受态细胞的制备
1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB 固体平板上划单菌落; 2、次晨,挑选单克隆感至内含1ml SOB 液体培养基的试管中,37℃,300rpm,6 hr; 3、然后转接到含400ml SOB 液体培养基的2L 摇瓶中(按1:500 的量转接),300rpm,4hr,然后每隔2 min 测一次OD ,至OD =0.76; 4、立刻置冰水浴中骤冷,可以选择在一 …
阅读更多 »BHK-21细胞的电转染条件是什么?
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21细胞的电转染条件是:对于0.2 cm电转杯,细胞密度为10×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为150V, 电容为950μF。对于0.4 cm电转杯,细胞密度为10×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为25 …
阅读更多 »电转染试剂(Entranster-E)转染Huh7细胞效果图
细胞电转染实验的几点建议
1. 电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …
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