2022年 10月 4日, 星期二
新闻

电转染

电转感受态细胞的制备

1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB 固体平板上划单菌落; 2、次晨,挑选单克隆感至内含1ml SOB 液体培养基的试管中,37℃,300rpm,6 hr; 3、然后转接到含400ml SOB 液体培养基的2L 摇瓶中(按1:500 的量转接),300rpm,4hr,然后每隔2 min 测一次OD ,至OD =0.76; 4、立刻置冰水浴中骤冷,可以选择在一 …

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电转染实验过程影响因素

1 电场参数 电场是电转染的重要因素,细胞在电场的作用下,膜通透性增加或是形成小孔,以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此,一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值,其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外,还可以 …

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电转效率受哪些因素影响?

电穿孔效率受以下几种因素的影响: 外加电场的强度。电压过低,培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过; 电压过高,细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系, 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔, 20% ~ 50%的细胞能够存活(根据台盼蓝拒染法的检测结果) ( Patterson 1979; Baum et al. …

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电转染实验时,方波形式的电转条件是什么?

       一般来说,方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定,即在保持电容不变的情况下,将脉冲长度减半,电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件,可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。对于engreen的Entranster-E …

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细胞电转染实验注意事项

选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定 …

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电转染实验的建议

关于细胞的电转染实验,现提出以下几点建议供大家参考: 1.   选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   选择合适的细胞 用于 …

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电转染实验时,细胞密度是多少合适?

       进行电穿孔实验时.,需确定每种细胞类型的最佳细胞密度,以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说,在含电转试剂的终体系中,电穿孔时的细胞密度一般在1-10×106细胞/ml范围内。对于悬浮细胞,最好是接近10×106细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞,建议的细胞密度为1-5×106 …

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