2025年 6 月 17日, 星期二
新闻

电转染

电转染时,指数衰减脉冲形式的电转条件是什么?

      对于engreen的Entranster-E电转染试剂,当使用0.4cm比色杯时,大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm比色杯时,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm比色杯的电穿孔实验,测试电压范围 …

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电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备

一、材料和试剂 恒温旋转式摇床 三角烧瓶(容量为1或2L) 50ml灭菌离心管 低温高速离心机 SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨     20g 细菌培养用酵母提取物      5g NaCl                     0.5g 去离子水                 950ml 250mmol/L KCl溶液        10ml 以5N …

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细胞电转染实验的几点建议

1.   电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …

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电转效率受哪些因素影响?

电穿孔效率受以下几种因素的影响: 外加电场的强度。电压过低,培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过; 电压过高,细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系, 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔, 20% ~ 50%的细胞能够存活(根据台盼蓝拒染法的检测结果) ( Patterson 1979; Baum et al. …

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电转感受态细胞的制备

1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB 固体平板上划单菌落; 2、次晨,挑选单克隆感至内含1ml SOB 液体培养基的试管中,37℃,300rpm,6 hr; 3、然后转接到含400ml SOB 液体培养基的2L 摇瓶中(按1:500 的量转接),300rpm,4hr,然后每隔2 min 测一次OD ,至OD =0.76; 4、立刻置冰水浴中骤冷,可以选择在一 …

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质粒被酶切过还可以电转吗?

可以,但得分情况来看: 如果质粒是线性化了(即被酶切成线状DNA): 可以电转,但是效率明显低于超级螺旋质粒(超螺旋 plasmid,通常是未切割、天然状态下的质粒结构)。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解,稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候,比如做基因组编辑(CRISPR knock-in)、整合型表达载体(需要基因组插入时),反而故意使用线 …

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电转染实验时,方波形式的电转条件是什么?

       一般来说,方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定,即在保持电容不变的情况下,将脉冲长度减半,电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件,可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。对于engreen的Entranster-E …

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