关于细胞的电转染实验,现提出以下几点建议供大家参考: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »电转染后细胞孵育时间是多少?
每种细胞类型电转染后有最佳孵育时间。对于质粒的电转染,最佳孵育时间一般为12-48小时,具体最佳时间需根据实验目的、质粒性质和表达蛋白的半衰期进行调整。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/efficient-electroporation
阅读更多 »电转染实验过程中易出现的问题
不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定 …
阅读更多 »细胞电转染实验的几点建议
1. 电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …
阅读更多 »电转染实验时,方波形式的电转条件是什么?
一般来说,方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定,即在保持电容不变的情况下,将脉冲长度减半,电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件,可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。对于engreen的Entranster-E …
阅读更多 »分步转染,先电转GFP-mRNA,表达很好,然后第二天电转了一个红色荧光DNA质粒,第三天观察的时候只看到了少数细胞有红色荧光,看不到绿色荧光了,这是怎么回事呀?按说GFP已经表达了,怎么还能消失了呢
根据你的描述,GFP在第一天有很好的表达,但在第二天转染DNA质粒后,第三天绿色荧光消失,只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素: 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制:你已经电转过mRNA,然后再转DNA质粒,这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应,比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译,不仅影响红色荧光蛋白(DNA …
阅读更多 »基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物
文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase (基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物) 影响因子 14.9(Trends in Biotechnology,20 …
阅读更多 »电转染实验时,siRNA有什么要求?
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列,以验证实验siRNA的特异性。同时也验证,针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
阅读更多 »电转效率受哪些因素影响?
电穿孔效率受以下几种因素的影响: 外加电场的强度。电压过低,培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过; 电压过高,细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系, 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔, 20% ~ 50%的细胞能够存活(根据台盼蓝拒染法的检测结果) ( Patterson 1979; Baum et al. …
阅读更多 »细胞电转染实验的几点建议
1. 电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …
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