2026年 6 月 19日, 星期五
新闻

电转染

问:现在是将构建好的质粒电转入到自制的感受态细胞里,质粒有10000bp,是90μL感受态细胞中加3.5μ质粒。我之前有电转过6000多bp的质粒,过夜培养可以长菌的。但是这个10000bp的质粒过夜培养没有单菌落,延长培养时间后有个别单菌落,但是挑单菌落到LB中并不浑浊。这种情况我是应该调整一下电转程序还是改一下加入质粒的量呢?

以下是详细的优化建议: 优化质粒用量(首要调整): 问题: 你目前使用的是3.5µL质粒加入90µL感受态细胞。关键在于质粒的浓度(ng/µL),而不是体积。 3.5µL 对于90µL感受态细胞来说体积不小,如果质粒浓度较高,实际DNA量可能大大超过电转最优范围。 原理: 过量的DNA会导致电击时产生过多的热量和离子效应,严重降低转化效率,尤其对大质粒(&g …

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电转染实验,如何设置正确的siRNA实验对照组?

1.设置空白对照组,检验细胞生长状态。 2.设置阴性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂 + 阴性siRNA。 3.设置阳性对照组,无血清培养基 + Entranster-E 电转染试剂+ 靶向siRNA 转染管家基因,比如GAPDH 或者 Lamin A/C,之后通过western blotting 或者 mRNA quantif …

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细胞电转染实验注意事项

选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定 …

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细胞电转染效率不高的原因是什么?

细胞电转染效率不高,有可能是以下原因造成的: 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2 …

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