英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
根据你的描述，GFP在第一天有很好的表达，但在第二天转染DNA质粒后，第三天绿色荧光消失，只有少数细胞有红色荧光。这可能涉及到几个不同的因素： 1. DNA质粒表达对GFP表达的抑制 高浓度DNA引起的翻译抑制：你已经电转过mRNA，然后再转DNA质粒，这可能引发细胞对大分子DNA的免疫反应，比如激活干扰素反应。这可能抑制了翻译，不仅影响红色荧光蛋白（DNA …
阅读更多 »电转染实验时，siRNA有什么要求？
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列，以验证实验siRNA的特异性。同时也验证，针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
阅读更多 »电转染实验时，细胞密度是多少合适？
进行电穿孔实验时.，需确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说，在含电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10×106细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，最好是接近10×106细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，建议的细胞密度为1-5×106 …
阅读更多 »细胞电转染实验的几点建议
1. 电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2 …
阅读更多 »BHK-21细胞的电转染条件是什么？
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21细胞的电转染条件是：对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为150V， 电容为950μF。对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为25 …
阅读更多 »细胞电转染实验注意事项
选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …
阅读更多 »电转染试剂对比
由此可见，在转染各类细胞系时，Entranster－E具有明显的优势，是一款比较理想的电转染试剂。
阅读更多 »电转效率受哪些因素影响？
电穿孔效率受以下几种因素的影响： 外加电场的强度。电压过低，培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过； 电压过高，细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系， 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔， 20% ～ 50％的细胞能够存活（根据台盼蓝拒染法的检测结果） ( Patterson 1979; Baum et al. …
阅读更多 »电转感受态细胞的制备
1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB 固体平板上划单菌落； 2、次晨，挑选单克隆感至内含1ml SOB 液体培养基的试管中，37℃，300rpm，6 hr； 3、然后转接到含400ml SOB 液体培养基的2L 摇瓶中（按1:500 的量转接），300rpm，4hr，然后每隔2 min 测一次OD ，至OD =0.76； 4、立刻置冰水浴中骤冷，可以选择在一 …
阅读更多 »基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物
文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase （基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物） 影响因子 14.9（Trends in Biotechnology，20 …
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