英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
近年来，对肠促胰岛素和骨的关系的兴趣不断增加。之前的研究已经表明胰高血糖素样肽-1（GLP-1）及其受体激动剂对骨骼代谢具有有益的合成代谢作用，如通过肠-骨轴促进成骨细胞的增殖和分化。然而，对于GLP-1对成骨细胞凋亡的影响及其相关机制并不清楚。现分享一篇RNA转染试剂（Entranster）与利拉鲁肽和 …
阅读更多 »RNA转染与多氯代二苯硫醚诱导活性氧和基因毒性研究
多氯化二苯硫化物（PCDPSS）是一类可以相互作用并激活芳基烃受体（AHR）的化学药物。之前的研究结果表明，PCDPSS可引起肝脏氧化应激。然而，有关PCDPSS基因毒性的信息是有限的。现分享一篇RNA转染（entranster）与多氯代二苯硫醚通过ahrcyp1a1途径可诱导活性氧和基因毒性研究的文献，以供参考。 文献地址：https://sc …
阅读更多 »细胞RNA转染实验注意事项
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想怎么办？
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与急性髓系白血病细胞系U937研究
白血病是儿童和青年常见的造血系统恶性肿瘤之一。急性髓系白血病（AML）主要由造血系统中原始骨髓细胞恶性集落增殖所引起，其特征是骨髓母细胞异常增殖和抑制正常造血细胞的生长。尽管造血干细胞移植和一些新药的出现对AML有一定的治疗作用，但除了急性早幼粒细胞白血病外，对于其他类型的AML仍然没有可治愈的治疗。因此，寻 …
阅读更多 »RNA转染与mir-155调节胶质瘤细胞增殖和侵袭研究
胶质瘤是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤，尽管治疗有所改善，脑胶质瘤患者的预后和生存率仍然非常差。特别是，根据目前WHO脑肿瘤分类，多形性胶质母细胞瘤是最恶性的胶质瘤。探索胶质瘤发生、发展的分子机制，已成为发展胶质瘤新的治疗策略的迫切需求。最近的研究已经报道了脑肿瘤细胞中miRNAs的改变，表明它们在癌基因或抑癌基因中的作用。 现分享一篇RNA转染（Entran …
阅读更多 »siRNA转染常见问题及解答
问：siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？ 答：siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问：哪种转染试剂效果好？ …
阅读更多 »做好siRNA转染的要点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与JMJD6和p53及结肠癌发生之间关系研究
umonji域包含6（JMJD6）是JumonjiC结构域蛋白家族的一个成员。相比于其他的家庭成员，JMJD6细胞活性仍不明确，其生物学功能仍然是很大的未开发。现分享一篇文献，文献中我报道JMJD6与肿瘤抑制基因p53相关，文献中用RNA转染（Entranster）研究JMJD6和p53及结肠癌发生之间的关系，以供参考。
阅读更多 »揭秘RNAi，缔造实验神话
用siRNA进行transient transfection不稳定，几代细胞以后，症状就会消失，所以在转染几天（1-3）后要立刻抽提蛋白，进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染，如果质粒含有抗生素位点，可以进行筛选，获得较稳定的细胞株系，但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染（infection），抗生素筛选后，可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
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