英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »RNA转染与非连接蛋白Cx32在宫颈癌细胞中作用的研究
缝隙连接蛋白（Cx）构成脊椎动物的缝隙连接（GJ），可调节重要的细胞过程，包括电耦合，增殖，分化和凋亡。与最初在上世纪60年代提出的“接触增长抑制”概念一致，GJ和CX被公认为肿瘤抑制；恶性肿瘤的特点是GJ的缺失。在恶性肿瘤细胞中，转染Cx以GJ依赖的方式提高放疗/化疗诱导的细胞凋亡（有毒的“旁观者效应”）。Cx在宫颈癌中的作用尚不清楚。现分享一篇RNA转染 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（OE-MSCs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应，包括调节性T细胞（Treg）的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，IL-17在胶原诱导性关节炎（CIA）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因是什么？
siRNA转染效率不理想，常见的原因有：1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总 …
阅读更多 »RNA转染（entranster）与miRNA-183促进黑质神经元凋亡研究
帕金森病是一种常见的神经系统疾病，是典型的纹状体功能障碍模型。它是仅次于阿尔茨海默病的第二常见神经退行性疾病。帕金森病的特征之一是黑质多巴胺能神经元的逐渐丧失。帕金森病患者通常有震颤、僵硬和运动迟缓的症状。遗传因素和环境因素已被纳入帕金森病的病因。对下丘脑核进行高频脑深部刺激是一种流行的外科治疗方法，但不适用于早期的PD，发展中国家的患者也无法获得。现分享一 …
阅读更多 »RNA转染与BAFF和BCMA结合诱导多发性骨髓瘤细胞存活研究
多发性骨髓瘤（MM）是一种无法治愈的血液恶性肿瘤，其特点是恶性浆细胞克隆性增殖，与大多数患者产生单克隆免疫球蛋白有关。细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10、干扰素-α和B细胞活化因子（BAFF）在促进MM细胞生长和耐药中的作用已得到明确阐述。越来越多的证据表明BAFF影响MM细胞的生长、存活、迁移和耐药性。B细胞成熟抗原（BCM …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »siRNA细胞转染应注意的事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »成功转染siRNA的主要关键点有什么？
1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …
阅读更多 »RNA转染与小鼠LRP5基因杂合缺失及调控成骨细胞分化研究
骨骼系统稳态受免疫系统的动态影响。低密度脂蛋白受体相关蛋白5（LRP5）是Wnt信号通路的共同受体，它调节人和小鼠的骨代谢。免疫紊乱可导致骨代谢异常。目前还不清楚LRP5是否以及如何改变免疫系统的平衡来调节骨稳态。 现分享一篇RNA转染（Entranster）与小鼠LRP5基因杂合缺失改变免疫细胞形态及调控成骨细胞分化研究的文献，以供参考。
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