英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
食管癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，预后差。化疗耐药和癌症复发是其治疗中最困难的问题之一。识别潜在的分子机制是发展新疗法的关键。现分享一篇RNA转染（Entranster）与食管鳞状细胞癌的生长抑制和放射增敏作用研究的文献，以供参考。
阅读更多 »细胞RNA转染的建议
为了做好RNA转染实验，提出几点关于细胞RNA转染实验的建议，供大家参考： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »siRNA转染与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是 …
阅读更多 »转染荧光效果良好，但是24小时qpcr没有敲低，是要延长收样时间吗？
这是个很实际的问题。在转染实验中，荧光标记良好说明转染效率高，但如果qPCR在24小时没有观察到预期的基因敲低效果，可能存在以下几种情况： 1. 延长收样时间可能是一个方向 有些siRNA或shRNA介导的敲低效果在48小时甚至72小时后才会明显，因为： mRNA的半衰期可能较长； 敲低并不等于马上降解已有的mRNA； 目标蛋白的表达也可能滞后。 建议： 设 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与树突状细胞相关的miRNA调节研究
表观遗传修饰在基因表达调控中起关键作用。为了了解表观遗传修饰在不同的环境中如何改变单核细胞来源的树突状细胞（DC）miRNA的表达，现分享一篇RNA转染（Entranster）与树突状细胞相关的miRNA调节研究的文献，以供参考。
阅读更多 »如何达到较高的RNA转染效率？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »siRNA细胞转染操作步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »RNA转染与LncRNA SNHG12对胃癌细胞BGC-823增殖影响的研究
胃癌是一种常见的上皮性癌，是世界范围内最常见的第五种恶性肿瘤。近年来胃癌的发病率一直呈上升趋势。每年约有一百万例胃癌发生，其中东亚地区占到50%，尤其是中国，严重危害人民健康和生命。中国胃癌的年发病率约为400000，占全世界病例总数的42%，并且总死亡率逐年上升。因此，寻找可靠的胃癌标志物和靶点是至关重要 …
阅读更多 »siRNA转染答疑专题总结（下）
Q9: 刚开始做实验，准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达，不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高？另外，一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响？ A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA，涉及到2个shRNA的表达和加工的问题，关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题，这就和你的载体，以及2个 …
阅读更多 »miRNA转染（Entranster）与白细胞介素IL-23受体和甲状腺炎研究
Hashimoto甲状腺炎（HT）是一种典型的器官特异性自身免疫性疾病，其特征是自身对甲状腺抗原的耐受性降低。白细胞介素IL-23受体（IL-23R）越来越被认为是自身免疫性疾病的一个关键点，包括Hashimoto甲状腺炎（HT）。然而，调节IL-23R表达的分子机制尚不清楚。现分享一篇miRNA转染（Entranster-R4000）与白细胞介 …
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