细胞转染

在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下，可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件： 细胞传代或重新播种：如果细胞已经长满（汇合度较高），可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代，重新播种在新的培养板上，使其达到较低的汇合度（例如30-50%），然后再进行感染。 优化感染时的MOI（Multiplicity of Infecti …

RNA转染试剂Entranster-R4000使用过程中常见问题及解决方案如下：

文献标题 Highly efficient prime editors for mammalian genome editing based on porcine retrovirus reverse transcriptase （基于猪逆转录病毒逆转录酶的高效哺乳动物基因组编辑引物） 影响因子 14.9（Trends in Biotechnology，20 …

可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量信息需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量信息，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

答：你描述的策略（铺板加药做qPCR，转染后加药做WB）是合理的，并且遵循了两种检测方法对时间需求的不同逻辑：qPCR关注转录早期/中期，WB关注蛋白积累的中/后期。 这不是唯一方案： qPCR： 有时也可以在转染后某个时间点（如6-12小时）加药，再培养足够时间（如再培养18-36小时）后收样，总处理时间也可能达到24-48小时。这取决于药物起效速度和你想 …

为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

共转染实验中，判断质粒的表达能力通常有几种常见的方式，具体方法取决于你的实验设计和质粒中所包含的标记。以下是几种常用的检测方式： 1. 荧光标记 如果质粒中包含了荧光标记基因（如GFP、RFP等），通过显微镜直接观察荧光信号是最直观的方式。这种方法不仅可以评估质粒的转染效率，还可以间接反映出质粒的表达能力。 优势：快速、简便，能够同时评估转染效率和蛋白表达。 …

转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …

siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。